人低溫離體灌注心臟心肌缺血損傷早期蛋白組學初步研究.pdf

1、世界衛(wèi)生組織推薦心肌缺血的診斷標準包括三個方面，病史與癥狀、心電圖(electrocardiogram，ECG)的表現(xiàn)和生化標志物。但臨床上心肌缺血的表現(xiàn)往往是不典型的，多樣性的，許多隱匿癥狀難以察覺；ECG 記錄心臟的電生理活動，只能在心肌缺血發(fā)生的幾分鐘內記錄，敏感性低，文獻報道ECG 診斷心肌缺血靈敏度低于50％。因此一種靈敏的、可靠的、能在心肌缺血損傷早期階段檢測出的特異性生物標志物將有助于急性心肌缺血患者的早期診斷和及時治療。

2、
　　 近年來蛋白質組學技術的飛速發(fā)展，為探索心肌缺血早期診斷的生物標志物提供了新的技術平臺。蛋白質組學通過對正常個體及病理個體間的蛋白質組進行比較分析，找到某些“疾病特異性的蛋白質分子”，從而為疾病的早期診斷提供分子標志。
　　 目的：
　　 對人低溫離體灌注心臟缺血損傷早期進行蛋白組學研究，分析人低溫離體灌注心臟缺血早期蛋白質的釋放情況，并對收集到的蛋白進行生理學過程和功能的分析，為最終篩選到能臨床診斷心肌缺

3、血損傷早期的特異性生物標志物打下基礎。
　　 方法：
　　 收集人離體心臟停跳后30min和60min后的低溫灌注停跳液，首先用MARS 柱去除樣品中的高豐度蛋白，用10KD分子篩脫鹽濃縮、溶液內酶解，得到肽段用MRP 柱再次脫鹽、凍干，通過HPLC-Chip-MS/MS 進行質譜鑒定，運用Agilent 公司的SpectrumMill 專業(yè)統(tǒng)計分析處理軟件進行IPI蛋白質數(shù)據(jù)庫搜索，通過GO 注釋和EBI 數(shù)據(jù)庫對得到

4、的蛋白進行功能、定位分析和BLAST 比對。
　　 結果：
　　 1、鑒定到高可信蛋白176個（Score ≧8，SPI ≧70％）。包括MB、LDH、CK、CA、H-FABP、GOT，以及A1BG和Actin (肌動蛋白)、Ceruloplasmin (銅藍蛋白)和兩個未知蛋白106KD蛋白、29KD蛋白。
　　 2、高可信蛋白中有87個蛋白參與了細胞過程，包括線粒體、細胞骨架、細胞器等組織；74個蛋白參與了生

5、物學調節(jié)，包括生物和代謝過程的調節(jié)以及基因表達調節(jié)；71個蛋白參與代謝過程，包括分解代謝過程和生物合成代謝過程，以及蛋白修飾過程等；
　　 44個參與了對刺激的反應，包括應激反應、免疫應答等；34個參與了定位確立，包括離子轉運和蛋白質轉運等；31個蛋白參與了發(fā)育過程，包括細胞分化和細胞發(fā)育過程等；
　　 其它的包括生物學粘附、多細胞生物過程等生理學過程。在功能方面，98個蛋白具有結合功能，47個蛋白具有催化活性，20個蛋

6、白具有酶調節(jié)活性，其它功能有結構分子活性、轉運活性、轉錄活性及抗氧化活性等。
　　 3、鑒定到106KD蛋白序列長度為1703AA，與unc-13蛋白序列同源性達到100％；
　　 29KD蛋白序列長度276AA，與LOC339524蛋白同源性達到99％，局部對比發(fā)現(xiàn)該序列117 位置出現(xiàn)空位。
　　 結論：
　　 1、檢測到高可信蛋白176個，通過生理學過程和功能的分析，對心臟缺血早期發(fā)生過程中蛋白質的

7、釋放情況有了進一步的認識，為最終篩選到能臨床診斷心肌缺血損傷早期的特異性生物標志物打下了基礎。
　　 2、高可信蛋白中沒有cTn，表明低溫離體灌注心臟1h內沒有出現(xiàn)心肌壞死，保證了心肌缺血損傷早期的實驗過程。
　　 3、A1BG、Actin、Ceruloplasmin 急性期反應蛋白在心肌缺血1h內出現(xiàn)，但未發(fā)現(xiàn)CRP、TNF-α、IL-6等炎癥因子，由于急性期反應蛋白與C 反應蛋白等炎癥因子密切相關，我們考慮在心肌缺血

8、損傷早期炎癥標志物是繼發(fā)于急性期反應蛋白后出現(xiàn)，但其確切關系尚需進一步研究。
　　 4、本研究檢測到的Actin、Ceruloplasmin、C6與趙慧輝等應用高解析離子淌度質譜與納升級超高效液相色譜技術尋找冠心病不穩(wěn)定心絞痛氣虛血瘀證的生物標志物相一致。
　　 5、檢測到兩個未知蛋白，106KD和29KD蛋白。106KD蛋白序列同源性屬于unc-13蛋白家族，初步推測106KD蛋白是一種出胞作用的蛋白，29KD蛋白是一