NAC家族對(duì)鐵皮石斛原球莖發(fā)生的機(jī)理研究與PIN的生物信息學(xué)分析.pdf

1、本論文主要關(guān)注NAC家族在胚胎發(fā)生過(guò)程中的作用，通過(guò)基于同源克隆的方法PCR擴(kuò)增鐵皮石斛中基因組中的NAC家族成員，利用RT-PCR和整體原位雜交分析NAC基因潛在功能。為了驗(yàn)證NAC基因功能的假設(shè)，通過(guò)RACE技術(shù)擴(kuò)增出了NAC基因全長(zhǎng)片段；將目標(biāo)基因和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白融合表達(dá)以驗(yàn)證基因功能。主要結(jié)論如下：
　　 1.從鐵皮石斛基因組中我們克隆出了57個(gè)NAC基因家族成員，數(shù)據(jù)顯示這些NAC基因片段的內(nèi)含子外顯子結(jié)構(gòu)多數(shù)是相

2、同的，暗示了NAC基因保守的基因結(jié)構(gòu)。然而這并不排除某些片斷沒(méi)有內(nèi)含子的情形。
　　 2.在克隆的NAC基因家族中，并不是所有的成員都在胚胎發(fā)生的過(guò)程中表達(dá)，表明NAC基因功能的多樣性。而在那些在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)的NAC基因中，表達(dá)模式也是不同的：某些NAC成員以一種組成型表達(dá)模式表達(dá)，例如DcNACl，而其他幾個(gè)則有表達(dá)水平的差異。這些結(jié)果顯示NAC基因在胚胎發(fā)生過(guò)程中起不同的作用。
　　 3.整體原位雜交顯示NAC

3、基因可能僅在原球莖的某些特定區(qū)域表達(dá)，以DcNACl為例，它僅在頂端即以后發(fā)育鱗葉的地方表達(dá)，說(shuō)明他可能在原球莖的形態(tài)建成上起重要作用。
　　 4.通過(guò)RACE技術(shù)，我們分離到了5個(gè)NAC基因全長(zhǎng)cDNA，同時(shí)獲得了其基因組序列。序列分析表明幾乎所用的NAC基因編碼的蛋白質(zhì)序列在320個(gè)氨基酸殘基之間。基于序列之間的相似性，NAC蛋白質(zhì)可以明顯的分為兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，保守的N端結(jié)構(gòu)域和多變的C端結(jié)構(gòu)域。BLAST結(jié)果顯示N端是作為DN