大黃素與P-gp、MRP2、MRP3相互作用及與黑豆主要成分配伍的研究.pdf

1、目的:
　　采用Ussing chamber技術(shù)建立藥物與大鼠腸粘膜MRP2、MRP3的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?yīng)用這兩種模型分別研究大黃素與MRP2、MRP3的相互關(guān)系。此外，在課題組前期研究基礎(chǔ)之上，考察大黃素對(duì)P-gp的影響，并將大黃素與黑豆中主要單體成分染料木素，染料木苷，大豆苷元，大豆苷進(jìn)行配伍實(shí)驗(yàn)，探討黑豆主要成分是否影響大黃素在腸道內(nèi)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　方法:
　　1.建立藥物與大鼠腸粘膜MRP2、MRP3相互

2、關(guān)系的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證模型。(1)在大鼠腸組織粘膜側(cè)加入MRP2抑制劑MK-571后，考察MRP2底物普伐他汀經(jīng)大鼠十二指腸、空腸、回腸段吸收方向與分泌方向的表觀滲透系數(shù)Papp及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率Er值的變化，若加入抑制劑MK-571后底物普伐他汀經(jīng)腸轉(zhuǎn)運(yùn)吸收方向Papp增加或分泌方向Papp減少及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率減少，則表明該實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證模型建立成功。(2)在大鼠腸組織粘膜側(cè)加入MRP3抑制劑苯溴馬隆后，考察MRP3底物替尼泊苷經(jīng)大鼠空腸、回腸及結(jié)腸吸收方向

3、與分泌方向表觀滲透系數(shù)Papp及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率Er值的變化，若加入抑制劑苯溴馬隆后底物替尼泊苷經(jīng)腸轉(zhuǎn)運(yùn)吸收方向表觀滲透系數(shù)增加或分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率減少，表明采用該技術(shù)研究藥物與腸道MRP3實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證模型建立成功。
　　2.應(yīng)用已建立的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究大黃素與MRP2之間的相互關(guān)系。(1)考察在大鼠腸粘膜組織加入不同濃度大黃素后，MRP2底物普伐他汀在大鼠空腸段吸收方向的表觀滲透系數(shù)與分泌方向的滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率的變化情況，

4、與不含大黃素的對(duì)照組相比，研究大黃素對(duì)底物普伐他汀經(jīng)腸吸收的影響，推測(cè)大黃素是否為MRP2的抑制劑或誘導(dǎo)劑。(2)在大鼠腸組織粘膜側(cè)加入MRP2抑制劑MK-571后，不同濃度大黃素在大鼠空腸段吸收方向與分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率的變化，將其與不含抑制劑MK-571的對(duì)照組相比，據(jù)此推測(cè)大黃素是否為MRP2的底物。
　　3.應(yīng)用已建立的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究大黃素與MRP3之間的相互關(guān)系。(1)考察在大鼠腸粘膜組織加入不同濃度大黃素后

5、，MRP3底物替尼泊苷在大鼠空腸段吸收方向的表觀滲透系數(shù)與分泌方向的滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率的變化情況，與不含大黃素的對(duì)照組相比，研究大黃素對(duì)底物替尼泊苷經(jīng)腸吸收的影響，推測(cè)大黃素是否為MRP3的抑制劑或誘導(dǎo)劑。(2)在大鼠腸組織粘膜側(cè)加入MRP3抑制劑苯溴馬隆后，不同濃度大黃素在大鼠空腸段吸收方向與分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率的變化情況，將其與不含抑制劑苯溴馬隆的對(duì)照組相比，據(jù)此推測(cè)大黃素是否為MRP3的底物。
　　4.考察大黃

6、素對(duì)P-gp底物地高辛經(jīng)腸吸收的影響，判斷大黃素是否為P-gp的抑制劑或誘導(dǎo)劑。在腸組織粘膜側(cè)加入不同濃度大黃素時(shí)，觀察底物地高辛在大鼠空腸段吸收方向與分泌方向的表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率的變化情況。
　　5.在大鼠腸組織粘膜側(cè)分別加入黑豆中四個(gè)主要單體成分染料木素、染料木苷、大豆苷元、大豆苷后，考察大黃素在大鼠空腸段吸收方向與分泌方向的表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率的變化情況，將其與不含黑豆單體成分的對(duì)照組相比較，初步探索黑豆中主要單體

7、成分對(duì)大黃素經(jīng)腸吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.(1)對(duì)照組中普伐他汀經(jīng)大鼠十二指腸、空腸、回腸分泌方向的表觀滲透系數(shù)分別為28.73±16.52、49.60±22.56、67.84±32.52。與對(duì)照組相比，濃度為100μg/mL的MK-571使普伐他汀在各腸段的分泌方向的表觀滲透系數(shù)降低，其中空腸(12.72±3.34)與回腸(22.45±14.09)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，十二指腸段無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。100μg/mL的MK-5

8、71可減少普伐他汀經(jīng)大鼠十二指腸、空腸及回腸段的外排轉(zhuǎn)運(yùn)率，且空腸與回腸段具有顯著性差異。(2)與對(duì)照組相比，200μg/mL的苯溴馬隆可使替尼泊苷經(jīng)大鼠空腸、回腸、結(jié)腸段吸收方向的表觀滲透系數(shù)增多，其中空腸段(3.72±0.97)有顯著差異(P＜0.01);200μg/mL的苯溴馬隆使替尼泊苷經(jīng)大鼠空腸，回腸及結(jié)腸段分泌方向的表觀滲透系數(shù)降低，與對(duì)照組相比，空腸，回腸與結(jié)腸段均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;200μg/mL的苯溴馬隆減少了替尼泊苷

9、經(jīng)大鼠空腸、回腸及結(jié)腸段的外排轉(zhuǎn)運(yùn)率，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。
　　2.(1)與對(duì)照組相比，加入不同濃度大黃素后，低、中、高濃度組中普伐他汀經(jīng)空腸段吸收方向的表觀滲透系數(shù)有所增加，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分泌方向的表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率無明顯改變。(2)聯(lián)合使用抑制劑MK-571后，低濃度組，大黃素經(jīng)空腸段吸收方向表觀滲透系數(shù)增加，分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率減少，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;中濃度組，大黃素經(jīng)空腸段吸收方向表觀

10、滲透系數(shù)增加(P＜0.01)，分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高濃度組，大黃素經(jīng)空腸段吸收方向表觀滲透系數(shù)增加（P＜0.01），外排轉(zhuǎn)運(yùn)率減少（P＜0.01），有顯著性差異，但分泌方向表觀滲透系數(shù)無明顯改變。
　　3.(1)與對(duì)照組相比，加入不同濃度大黃素后，低、中、高濃度組中替尼泊苷經(jīng)空腸段分泌方向的表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率有所下降，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)聯(lián)合使用抑制劑苯溴馬隆后，低濃度組，大黃素經(jīng)空腸段

11、分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率增加，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;中濃度與高濃度組，大黃素經(jīng)空腸段分泌方向表觀滲透系數(shù)增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，外排轉(zhuǎn)運(yùn)率無明顯改變。
　　4.與對(duì)照組相比，加入不同濃度大黃素后，低濃度與中濃度組中，P-gp底物地高辛經(jīng)空腸段分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);高濃度組中，地高辛吸收方向表觀滲透系數(shù)減少(P＜0.01)，分泌方向表觀滲透系數(shù)無明顯變化，外排轉(zhuǎn)運(yùn)率增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

12、。
　　5.與對(duì)照組相比，加入黑豆中不同單體成分后，在染料木素組，大黃素經(jīng)空腸分泌方向的表觀滲透系數(shù)增加，有顯著性差異（P＜0.05），吸收方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率有所增加，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大豆苷元組，大黃素經(jīng)空腸段分泌方向表觀滲透系數(shù)增加（P＜0.01)，外排轉(zhuǎn)運(yùn)率增加（P＜0.05)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而染料木苷與大豆苷組中，大黃素經(jīng)腸吸收方向與分泌方向表觀滲透系數(shù)及外排轉(zhuǎn)運(yùn)率，同對(duì)照組相比，均無明顯變化。
　　結(jié)論