附子大黃成分配伍對(duì)結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：測(cè)定烏頭堿對(duì)小鼠結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）的最小毒性濃度，并研究烏頭堿對(duì)結(jié)腸ICC的毒作用機(jī)制；從成分配伍的層次探討烏頭堿與大黃素配伍對(duì)結(jié)腸ICC的毒-效作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用均勻設(shè)計(jì)法和MTT比色法，研究不同濃度和不同時(shí)間點(diǎn)烏頭堿對(duì)小鼠結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cells of Cajal，ICC）的影響，從而確定烏頭堿對(duì)結(jié)腸 ICC的最小毒性濃度；將毒性濃度和藥效濃度的大黃素分別與毒性濃

2、度的烏頭堿配伍，使用MTT法測(cè)定其對(duì)結(jié)腸ICC存活情況的影響；使用光學(xué)顯微鏡觀(guān)察兩者配伍時(shí)，對(duì)結(jié)腸ICC形態(tài)學(xué)的影響；采用細(xì)胞酶學(xué)法、比濁法、酶聯(lián)免疫法等方法研究?jī)烧吲湮闀r(shí)，對(duì)結(jié)腸 ICC細(xì)胞生物膜、內(nèi)環(huán)境、能量代謝的影響，從而觀(guān)察毒性濃度和藥效濃度大黃素分別與毒性濃度烏頭堿配伍使用時(shí)的作用效果，以探討兩者配伍對(duì)結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞的毒-效作用機(jī)制。
　　結(jié)果：烏頭堿對(duì)結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞的最小毒性濃度為0.005％。毒性濃度

3、的烏頭堿可使小鼠結(jié)腸 ICC細(xì)胞數(shù)量顯著減少，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生大幅改變：細(xì)胞萎縮變形、突起斷裂、胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡、折光性消失、細(xì)胞開(kāi)始解體。而當(dāng)烏頭堿與大黃素混合使用時(shí)，上述細(xì)胞受損情況可以得到一定程度的抑制，細(xì)胞損傷情況降低。
　　0.1%的烏頭堿作用結(jié)腸ICC30min后，細(xì)胞內(nèi)ACP活力和細(xì)胞介質(zhì)中MDA含量升高，細(xì)胞內(nèi) Na+、K+、Ca2+含量降低，Na+K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活力下降；

4、0.005%烏頭堿作用結(jié)腸ICC30min后，細(xì)胞內(nèi)ACP活力和細(xì)胞介質(zhì)中MDA含量升高，細(xì)胞內(nèi)Na+、Ca2+含量升高，K+含量降低， Na+K+-ATP酶活力增加、Ca2+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活力降低。在大黃素作用于ICC30min后，可見(jiàn)不同藥效濃度的大黃素能不同程度的升高細(xì)胞內(nèi)ACP活力和細(xì)胞介質(zhì)中MDA含量，降低ICC內(nèi)的Na+、Ca2+含量，而升高K+含量，且使Na+K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca

5、2+Mg2+-ATP酶活力顯著增加。毒性濃度的大黃素與烏頭堿配伍使用后，可加重對(duì)結(jié)腸 ICC的毒性作用；藥效濃度的大黃素與烏頭堿配伍后可從一定程度上減輕烏頭堿對(duì) ICC所導(dǎo)致的上述指標(biāo)的改變，拮抗烏頭堿對(duì)結(jié)腸ICC的毒性作用。
　　結(jié)論：0.005%、0.1%的烏頭堿作用30min后，對(duì)結(jié)腸ICC細(xì)胞有顯著的毒性作用，細(xì)胞形態(tài)向病理方向改變，并可使細(xì)胞出現(xiàn)生物膜損傷、內(nèi)環(huán)境紊亂、能量代謝障礙等方面的變化。不同藥效濃度的大黃素與烏頭