姜黃素靶向調(diào)控HSP90及對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲作用的研究.pdf

1、目的：
　　本研究對膠質(zhì)瘤組織及正常腦組織中HSP90蛋白的表達(dá)、細(xì)胞增殖和凋亡進(jìn)行測定，分析HSP90與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征的相關(guān)性及其對細(xì)胞增殖和凋亡的影響，以探討姜黃素靶向調(diào)控HSP90抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲的作用機(jī)制，旨在為膠質(zhì)瘤治療提供理論基礎(chǔ)及新的思路，同時(shí)也為尋找新的HSP90抑制劑治療膠質(zhì)瘤奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　(1)采集50例神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織樣本，其中男性28例，女性22例。年齡在23～78歲

2、之間，平均為37.55±11.2歲;所有膠質(zhì)瘤患者中，WHOⅠ級(jí)6例，Ⅱ級(jí)8例，Ⅲ級(jí)17例，Ⅳ級(jí)19例;同時(shí)設(shè)立經(jīng)CT和MRI等影像學(xué)檢測證實(shí)無任何腫瘤性疾病的10例由于外傷或者腦出血而進(jìn)行顱內(nèi)減壓的正常腦組織樣本作為對照。運(yùn)用western blot法分別檢測上述樣本中HSP90蛋白的表達(dá)情況，分析HSP90的表達(dá)與臨床病理分級(jí)的相關(guān)性。
　　(2)將HSP90 siRNA轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤T98G細(xì)胞用以抑制其表達(dá)，熒光定量PCR檢測

3、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HSP90 mRNA的表達(dá)情況;MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的凋亡情況。
　　(3)體外malachite green-molybdate顯色反應(yīng)以及ATP-瓊脂糖凝膠結(jié)合實(shí)驗(yàn)檢測姜黃素對HSP90的抑制活性，同時(shí)分別運(yùn)用MTT法、Transwell小室法檢測姜黃素對T98G細(xì)胞增殖和侵襲的影響，此外通過western blot法檢測姜黃素對基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)以及HSP90表達(dá)的

4、影響。
　　結(jié)果：
　　(1)在膠質(zhì)瘤組織中HSP90蛋白表達(dá)量顯著高于其在正常腦組織中的表達(dá)(P＜0.01)，且隨著病理級(jí)別的增高其表達(dá)量呈上升趨勢;運(yùn)用Spearman軟件分析膠質(zhì)瘤患者臨床病理分級(jí)與HSP90蛋白表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果為:HSP90蛋白表達(dá)的相關(guān)系數(shù)r=0.713(P＜0.001)，表明膠質(zhì)瘤組織中HSP90蛋白表達(dá)與臨床病理分級(jí)呈正相關(guān)，即在高級(jí)別病例組中高表達(dá)，在低級(jí)別病例組中低表達(dá)。
　　(2)

5、隨著時(shí)間的延長，HSP90 siRNA作用后T98G細(xì)胞的增殖能力逐漸下降。當(dāng)作用第3、4、5、6天時(shí)，siHSP90組T98G細(xì)胞的增殖活性較對照組均有下降，其中第4、5、6天時(shí)降低幅度顯著，差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);對照組細(xì)胞的凋亡率為（8.35±1.27）％，siHSP90組細(xì)胞的凋亡率為（17.88±0.13）％，兩組相比差異具有高度顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　(3)姜黃素能夠抑制HSP90重組

6、蛋白的ATPase活性，其活性的IC50值為83.3μ/mol;姜黃素能夠抑制HSP90蛋白與ATP-瓊脂糖凝膠株結(jié)合，且這種結(jié)合抑制作用隨姜黃素濃度的增高而增強(qiáng);T98G細(xì)胞增殖能力隨著姜黃素濃度的增高而逐漸降低，即姜黃素濃度越高其抑制T98G細(xì)胞增殖的作用越明顯，呈劑量依賴性;T98G細(xì)胞的侵襲能力隨著姜黃素濃度的增高而逐漸降低;MMP-9蛋白的表達(dá)量隨著姜黃素濃度的增高而逐漸降低，且呈劑量依賴性，而HSP90蛋白的表達(dá)則未發(fā)生明顯