PKC對Jurkat細胞中hsp90基因表達調(diào)控的研究.pdf

1、在細胞應(yīng)答熱休克過程中最早期的事件是將脅迫信號從細胞表面?zhèn)髦良毎麅?nèi),從而誘導(dǎo)熱休克蛋白的合成使細胞產(chǎn)生對熱的耐受性.Hsp90是熱休克蛋白家族中一類獨特的、含量豐富的并對細胞存活必不可少的胞質(zhì)蛋白.它參與調(diào)節(jié)包括基因轉(zhuǎn)錄、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞生長、發(fā)育、凋亡等許多重要的生理過程.因此研究參與熱休克誘導(dǎo)的hsp90的基因表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑將有助于對Hsp90在熱脅迫中的分子功能的理解.蛋白激酶C(PKC)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,它不僅

2、在將外界刺激信號從細胞表面?zhèn)髦良毎麅?nèi)的過程中起了關(guān)鍵的作用,同是也是許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的一個中央樞紐.它還可調(diào)節(jié)許多生物功能包括細胞增殖、分化和凋亡等.該研究則主要探討了PKC和熱休克蛋白Hsp90在熱休克應(yīng)答過程中兩者之間的關(guān)系.該論文首先PKC對熱休克誘導(dǎo)的Jurkat細胞中hsp90基因表達的調(diào)節(jié),包括了不同的PKC抑制劑對熱休克誘導(dǎo)的hsp90的mRNA水平和啟動子活性的影響.在此基礎(chǔ)上進一步觀察了熱休克對Jurkat細胞中的PK

3、C在細胞中定位的影響.然后將顯性負突變PKC-ε質(zhì)粒(DN-PKC-ε)和組成性活化PKC-ε質(zhì)粒(CA-PKC-ε)等真核表達質(zhì)鑿瞬時轉(zhuǎn)染到Jurkat細胞中,通過競爭性RT-PCR的方法證實PKC-ε在熱休克誘導(dǎo)的hsp90β的基因表達中起了一個關(guān)鍵的作用.最后應(yīng)用免疫共沉淀的方法觀察了PKC-ε和Hsp90β是否存在直接的相互作用.此外,根據(jù)Hsp90不同的功能結(jié)構(gòu)域一系列的hsp90的真核表達亞克隆和原核表達亞克隆被構(gòu)建成功,為