真蛸熱休克蛋白90(HSP90)兩亞型基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、廈門(mén)大學(xué)碩士學(xué)位論文真蛸熱休克蛋白90（HSP90)兩亞型基因的克隆與表達(dá)研究姓名：孫田田申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：海洋生物技術(shù)指導(dǎo)教師：蘇永全201206摘要3)HSP90家族蛋白具有較高的穩(wěn)定性，兩亞型均存在保守的結(jié)構(gòu)域，即N末端存在1個(gè)HATPaseC保守結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有內(nèi)源ATP酶活性，是ATP結(jié)合部位。另兩亞型均具有HSP90蛋白家族共有的5個(gè)保守信號(hào)序列區(qū)，其氨基酸序列分別為NKEIFLRELISN(S／A)SDALDKI

2、R、LGTIAKSGT、IGQFGVGFYS(A廠r)(Y／F)LVAD、(IⅣ)K(L／M)Y(V／A)RRVFI、GVVDS(E／D)(N／D)LPLN(I／V)SRE，存在個(gè)別氨基酸位點(diǎn)的差異?；贖SP90氨基酸序列利用NJ法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)也分析驗(yàn)證了兩亞型分別具備較高的保守性且在進(jìn)化關(guān)系上存在一定的相似性。4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析HSP90兩亞型在真蛸各組織中的時(shí)空表達(dá)模式，結(jié)果顯示兩亞型基因廣泛分布于不同組織中，但在

3、不同組織中存在表達(dá)差異性。兩亞型基因在不同組織中呈現(xiàn)比較相似的表達(dá)規(guī)律，借助與參照基因13actin的基因表達(dá)量對(duì)比顯示，兩亞型基因均在肝組織中表達(dá)量最高，性腺組織和腦組織中次之。溫度應(yīng)激條件下兩亞型的表達(dá)趨勢(shì)呈現(xiàn)不同的變化規(guī)律，其中HSP90a隨著應(yīng)激溫度的不斷升高，在肝和鰓組織內(nèi)的基因表達(dá)量與溫度應(yīng)激呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，但在超出臨界溫度時(shí)表達(dá)量急劇下降。HSP9013則隨著溫度的升高基本呈現(xiàn)相對(duì)穩(wěn)定的表達(dá)水平。根據(jù)兩亞型基因在溫度變化條

4、件下呈現(xiàn)出來(lái)的表達(dá)量差異，推測(cè)HSP90a在真蛸遭受高溫應(yīng)激時(shí)參與了免疫防御過(guò)程并發(fā)揮了重要的保護(hù)作用，而HSP901B則主要在維持真蛸的正常生理功能中發(fā)揮重要作用。本研究首次克隆頭足綱真蛸的HSP90基因，從所獲得的HSP90兩亞型氨基酸序列了進(jìn)行了相關(guān)系統(tǒng)發(fā)育分析；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析了HSP90在真蛸組織中的時(shí)空表達(dá)特征，并分析了其在遭遇高溫應(yīng)激時(shí)所產(chǎn)生的表達(dá)量變化；這些研究結(jié)果將有助于更深入地探討HSP90在真蛸生理活動(dòng)中