馬鈴薯甲蟲熱激蛋白基因hsp60、hsp70和hsp90的克隆及溫度脅迫下的表達.pdf

1、馬鈴薯甲蟲Leptinotarsa decemlineata(Say)是一種抗逆性極強的國際性檢疫害蟲,對溫度脅迫具有很強的適應(yīng)性。為了明確馬鈴薯甲蟲溫度脅迫適應(yīng)性的分子生態(tài)機制,本研究采用生物信息學(xué)手段結(jié)合RT-PCR和RACE技術(shù),對馬鈴薯甲蟲HSP60、HSP70和HSP90基因的全長cDNA序列進行了克隆與序列分析,并利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測了溫度脅迫后Ld-hsp60和Ld-hsp90的相對表達量。主要研究結(jié)果如下:

2、r>　　首次在馬鈴薯甲蟲中成功克隆得到HSP90和HSP60基因的全長cDNA,分別命名為Ld-hsp90、Ld-hsp60。cDNA序列全長分別為2489bp、2234bp,其5’端非翻譯區(qū)(UTR)分別長113bp、101bp,3’ UTR長度分別為216bp、402bp。完整的開放閱讀框長度分別為2160bp、1731bp,分別編碼719、576個氨基酸。氨基酸序列分別具有HSP90、HSP60家族典型的高度保守的特征序列。

3、>　　獲得了3個HSP70基因的全長cDNA序列,分別為2199bp的Ld-hsp70a、2397bp的Ld-hsp70b和2482bp的Ld-hsp70c。其5’UTR分別長92bp、132bp、289bp,3’UTR長度分別為160bp、291bp、203bp。完整的開放閱讀框長度分別為1947bp、1974bp、1890bp,分別編碼648、657和629個氨基酸。三者的氨基酸序列一致性為71.50％。氨基酸序列均含有HSP70家