橢圓食粉螨Hsp70基因的克隆及其在熱脅迫下的表達(dá)研究.pdf

1、橢圓食粉螨隸屬粉螨科，是常見的儲糧害螨，對人類經(jīng)濟(jì)及健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。橢圓食粉螨的種群動態(tài)受到溫度的影響很大，超過適宜的溫度范圍就會造成熱脅迫，熱脅迫則會誘導(dǎo)其體內(nèi)熱激蛋白的表達(dá)來應(yīng)對逆境。本文以橢圓食粉螨為材料，通過RT-PCR以及RACE技術(shù)克隆得到了橢圓食粉螨2個Hsp70基因cDNA的全長，并對其生物信息學(xué)進(jìn)行分析，通過熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)探究Hsp70 mRNA在不同螨態(tài)及熱脅迫下的表達(dá)水平，主要研究結(jié)論如下：

2、
　　1、克隆得到了橢圓食粉螨2條 Hsp70的全長分別命名為：AoHsp70-1和AoHsp70-2，其中AoHsp70-1基因GenBank登錄號為KX237517，cDNA的全長為2307 bp，其中開放閱讀框（ORF）為1974 bp，編碼657個氨基酸殘基，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為71.92 KDa，等電點(diǎn)pI為5.27，其氨基酸序列包含3個Hsp70家族的簽名序列，C-端存在GGXP4肽重復(fù)序列，C-端末端存在胞質(zhì)標(biāo)志性基序E

3、EVD，；AoHsp70-2基因GenBank登錄號為KX237518，cDNA的全長為2623 bp，其中ORF為1923 bp，編碼640個氨基酸殘基，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為70.64 KDa，等電點(diǎn)pI為5.56，其氨基酸序列包含3個Hsp70家族的簽名序列， C-端末端存在胞質(zhì)標(biāo)志性基序EEVD，AoHsp70-1和AoHsp70-2它們的氨基酸序列都缺失信號肽切割位點(diǎn)，氨基酸序列中都含有6個N-糖基化位點(diǎn)，氨基酸序列都存在多處疏水區(qū)

4、，預(yù)測的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)包含N-端結(jié)構(gòu)域（NBD）和底物結(jié)合域（SBD）兩個結(jié)構(gòu)域。多重序列比對的結(jié)果顯示 Hsp70具有高度的同源性，不同物種間氨基酸相似性在60％以上，通過 NJ法構(gòu)建系統(tǒng)樹，結(jié)果顯示 AoHsp70-1和AoHsp70-2先聚為一支，然后再與其他螨類的Hsp70聚為一個大分支，其他所有昆蟲的Hsp70聚為一個大分支。
　　2、橢圓食粉螨在不同發(fā)育階段（卵、幼螨、若螨及雌成螨）下其Hsp70的表達(dá)水平不盡相同，其

5、中 AoHsp70-1在雌成螨中表達(dá)水平略高于其他螨態(tài)，但是也沒有顯著性差異，而 AoHsp70-2在若螨中表達(dá)水平最高，是對照組的5.01倍。低溫脅迫下AoHsp70-1的表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異，而 AoHsp70-2的表達(dá)水平隨著溫度的降低而明顯升高，并且在5℃時達(dá)到最大值為對照組的9.62倍，隨著溫度的進(jìn)一步降低 AoHsp70-2表達(dá)水平開始下降。高溫脅迫下 AoHsp70-1在不同溫度下的表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異，而 AoHsp7