熱應(yīng)激對(duì)大鼠肝臟HSP70表達(dá)及其mRNA豐度變化規(guī)律的研究.pdf

1、以大鼠為試驗(yàn)動(dòng)物,采用比色法、Western-blotting、半定量RT-PCR和Real-time PCR技術(shù),從不同熱應(yīng)激強(qiáng)度(25℃、30℃、35℃和40℃)和40℃熱應(yīng)激后不同處理時(shí)間(0.5h,1.5h,2h,2.5h,4h和6h)兩個(gè)角度,檢測(cè)分析了大鼠血清中的丙二醛(MDA)含量、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和總抗氧化能力(T-AOC)的大小,動(dòng)態(tài)考察了大鼠肝臟中HSP70的表達(dá)量及其mRNA豐度變化規(guī)律,探討HS

2、P70mRNA水平的變化與熱休克蛋白70表達(dá)的相關(guān)性,結(jié)果表明:
　　 1.應(yīng)用比色法,對(duì)熱應(yīng)激大鼠血清中抗氧化能力指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定。與對(duì)照組25℃相比,30℃時(shí),大鼠血清的MDA略有下降(P＞0.05)。35℃時(shí)和40℃時(shí),血清的MDA極顯著的降低(P＜0.01)。大鼠血清的SOD活力和T-AOC分別呈升高和降低的趨勢(shì),各熱應(yīng)激組的SOD活力和T-AOC值與對(duì)照組相比,差異極顯著(P＜0.01)。在不同熱應(yīng)激時(shí)間處理下,大鼠血清

3、的MDA先升高,在4h時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.01),之后開(kāi)始下降,在6h時(shí)與0.5h相比差異不顯著。大鼠血清的SOD活力和T-AOC值均處于上下波動(dòng)狀態(tài),各熱應(yīng)激處理組的SOD活力均比0.5h極顯著的升高(P＜0.01)。血清的T-AOC值除在熱應(yīng)激處理1h后顯著的升高(P＜0.05)和1.5h、2h后極顯著的下降外(P＜0.01),其他各組無(wú)明顯差異。
　　 2.應(yīng)用Western-blotting方法,對(duì)熱應(yīng)激大鼠肝臟中HSP

4、70的表達(dá)量進(jìn)行了測(cè)定。大鼠肝臟HSP70在25℃就有較低水平的表達(dá),與對(duì)照組相比,在30℃時(shí),肝臟HSP70表達(dá)量就明顯的增加(P＜0.05)。35℃和40℃2時(shí),表達(dá)量極顯著的增加(P＜0.01)。不同的熱應(yīng)激時(shí)間時(shí),大鼠肝臟HSP70表達(dá)量呈先增加,到2h時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值(P＜0.01),隨著熱應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),HSP70表達(dá)量開(kāi)始下降。在熱應(yīng)激處理4h和6h時(shí),HSP70表達(dá)量與0.5h相比差異不顯著(P＞0.05)。
　　

5、 3.應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)對(duì)熱應(yīng)激大鼠肝臟HSP70mRNA進(jìn)行了定量研究。不同強(qiáng)度的熱應(yīng)激對(duì)大鼠肝臟HSP70mRNA的表達(dá)量有顯著影響,在30℃時(shí),HSP70mRNA表達(dá)量略有下降(P＞0.05)。在35℃和40℃時(shí),表達(dá)量顯著的高于對(duì)照組(P＜0.05)。在不同的熱應(yīng)激時(shí)間里,大鼠肝臟HSP70mRNA的表達(dá)量呈先迅速增加,到熱應(yīng)激1h時(shí)達(dá)到最高(P＜0.01)。隨著熱應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng),HSP70mRNA的表達(dá)量開(kāi)始下降,各

6、熱應(yīng)激處理組的表達(dá)量均極顯著的高于0.5h組(P＜0.01)。
　　 4.應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)對(duì)熱應(yīng)激大鼠肝臟HSP70mRNA進(jìn)行了定量研究。不同強(qiáng)度的熱應(yīng)激對(duì)大鼠肝臟HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄量有極顯著的影響,各熱應(yīng)激處理組的HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄量極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。在不同的熱應(yīng)激時(shí)間里,大鼠肝臟HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄量呈先迅速升高,到熱應(yīng)激1h時(shí)達(dá)到峰值(P＜0.01),之后開(kāi)始降低。在熱應(yīng)

7、激1.5h時(shí)和2h時(shí),極顯著高于0.5h(P＜0.01)。而在熱應(yīng)激2.5h和4h時(shí),極顯著的低于0.5h(P＜0.01)。在熱應(yīng)激6h時(shí),與0.5h相比差異不顯著(P＞0.05)。
　　 5.通過(guò)兩個(gè)等級(jí)(秩)變量間的相關(guān)分析表明,Real-time PCR和半定量RT-PCR基因檢測(cè)結(jié)果極相關(guān),兩種定量PCR檢測(cè)HSP70mRNA無(wú)差異,基本反映了熱應(yīng)激狀態(tài)下HSP70mRNA轉(zhuǎn)錄的規(guī)律。研究表明,肝臟HSP70mRNA對(duì)熱