熱應激對大鼠肝臟HSP70表達及其mRNA豐度變化規(guī)律的研究.pdf

1、以大鼠為試驗動物,采用比色法、Western-blotting、半定量RT-PCR和Real-time PCR技術,從不同熱應激強度(25℃、30℃、35℃和40℃)和40℃熱應激后不同處理時間(0.5h,1.5h,2h,2.5h,4h和6h)兩個角度,檢測分析了大鼠血清中的丙二醛(MDA)含量、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和總抗氧化能力(T-AOC)的大小,動態(tài)考察了大鼠肝臟中HSP70的表達量及其mRNA豐度變化規(guī)律,探討HS

2、P70mRNA水平的變化與熱休克蛋白70表達的相關性,結果表明:
　　 1.應用比色法,對熱應激大鼠血清中抗氧化能力指標進行了測定。與對照組25℃相比,30℃時,大鼠血清的MDA略有下降(P＞0.05)。35℃時和40℃時,血清的MDA極顯著的降低(P＜0.01)。大鼠血清的SOD活力和T-AOC分別呈升高和降低的趨勢,各熱應激組的SOD活力和T-AOC值與對照組相比,差異極顯著(P＜0.01)。在不同熱應激時間處理下,大鼠血清

3、的MDA先升高,在4h時達到高峰(P＜0.01),之后開始下降,在6h時與0.5h相比差異不顯著。大鼠血清的SOD活力和T-AOC值均處于上下波動狀態(tài),各熱應激處理組的SOD活力均比0.5h極顯著的升高(P＜0.01)。血清的T-AOC值除在熱應激處理1h后顯著的升高(P＜0.05)和1.5h、2h后極顯著的下降外(P＜0.01),其他各組無明顯差異。
　　 2.應用Western-blotting方法,對熱應激大鼠肝臟中HSP

4、70的表達量進行了測定。大鼠肝臟HSP70在25℃就有較低水平的表達,與對照組相比,在30℃時,肝臟HSP70表達量就明顯的增加(P＜0.05)。35℃和40℃2時,表達量極顯著的增加(P＜0.01)。不同的熱應激時間時,大鼠肝臟HSP70表達量呈先增加,到2h時表達量達到峰值(P＜0.01),隨著熱應激時間的延長,HSP70表達量開始下降。在熱應激處理4h和6h時,HSP70表達量與0.5h相比差異不顯著(P＞0.05)。
　　

5、 3.應用半定量RT-PCR技術對熱應激大鼠肝臟HSP70mRNA進行了定量研究。不同強度的熱應激對大鼠肝臟HSP70mRNA的表達量有顯著影響,在30℃時,HSP70mRNA表達量略有下降(P＞0.05)。在35℃和40℃時,表達量顯著的高于對照組(P＜0.05)。在不同的熱應激時間里,大鼠肝臟HSP70mRNA的表達量呈先迅速增加,到熱應激1h時達到最高(P＜0.01)。隨著熱應激時間的延長,HSP70mRNA的表達量開始下降,各

6、熱應激處理組的表達量均極顯著的高于0.5h組(P＜0.01)。
　　 4.應用Real-time PCR技術對熱應激大鼠肝臟HSP70mRNA進行了定量研究。不同強度的熱應激對大鼠肝臟HSP70mRNA的轉錄量有極顯著的影響,各熱應激處理組的HSP70mRNA的轉錄量極顯著高于對照組(P＜0.01)。在不同的熱應激時間里,大鼠肝臟HSP70mRNA的轉錄量呈先迅速升高,到熱應激1h時達到峰值(P＜0.01),之后開始降低。在熱應

7、激1.5h時和2h時,極顯著高于0.5h(P＜0.01)。而在熱應激2.5h和4h時,極顯著的低于0.5h(P＜0.01)。在熱應激6h時,與0.5h相比差異不顯著(P＞0.05)。
　　 5.通過兩個等級(秩)變量間的相關分析表明,Real-time PCR和半定量RT-PCR基因檢測結果極相關,兩種定量PCR檢測HSP70mRNA無差異,基本反映了熱應激狀態(tài)下HSP70mRNA轉錄的規(guī)律。研究表明,肝臟HSP70mRNA對熱