GGA誘導AD大鼠海馬HSP70表達及其抗細胞凋亡機制的研究.pdf

1、背景與目的:阿爾茨海默病(AD)是一種以進行性記憶力減退、認知功能障礙為特征的中樞神經系統(tǒng)變性疾病，病因和發(fā)病機制至今尚未完全清楚。近年研究發(fā)現(xiàn)，AD腦內存在熱休克蛋白70(heat shock protein 70)表達變化，并和神經元的存活有關聯(lián)。HSP是細胞受到各種刺激時產生的高度保守的具有重要生理功能的多肽類蛋白質分子家族，可通過分子伴侶作用調節(jié)蛋白質的正常結構功能及抗氧化、抗凋亡等作用提高細胞對應激原的耐受，保護細胞抗損傷。目

2、前已證實，抗?jié)兯幬?GGA)可明顯誘導大鼠胃腸、肝臟、心臟、視網(wǎng)膜等多種器官組織甚至中樞神經系統(tǒng)的HSP70表達。國外已將其應用于腦血管病動物模型，發(fā)現(xiàn)可明顯誘導腦內HSP70表達而發(fā)揮神經保護作用?，F(xiàn)國內外均尚未有將GGA用于AD研究的報道。我們通過實驗建立AD大鼠模型，觀察模型大鼠以及GGA灌胃干預后其海馬HSP70表達的情況和行為組織學改變，研究GGA誘導AD大鼠海馬HSP70表達及其神經保護作用并探討可能機制，為臨床治療AD提

3、供新的理論基礎和方法。 方法:健康雄性SD大鼠144只隨機分為對照組、模型組、GGA干預組，每組各48只，其中，每組又分為術后1天、術后7天、術后14天和術后21天4個時間點，各時間點每組12只大鼠。模型組和GGA干預組大鼠雙側海馬注射Aβ1-42，對照組注射等量溶媒。術后大鼠清醒后GGA組即予GGA800mg/kg/d灌胃，余兩組予等量生理鹽水灌胃，持續(xù)21天。術前及術后7天、14天、21天Y迷宮測試各組大鼠學習記憶能力；各時

4、間點行為學測試結束后處死動物，每組取6只大鼠腦組織冰凍切片行HE染色，觀察海馬CA1區(qū)神經元形態(tài)改變；剛果紅染色觀察Ap的沉積；每組再各取6只用RT-PCR和Western-blot測定各時間點大鼠海馬HSP70基因和蛋白表達變化。 結果: 1.術前各組大鼠獲得記憶所需電擊次數(shù)比較差異無統(tǒng)計學意義，隨時間的推移，模型組大鼠達到學會標準所需電擊次數(shù)逐漸增加，術后14天與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義，術后21天模型組大鼠學習記

5、憶能力下降最顯著。GGA組大鼠術后14天、21天達到學會標準所需電擊次數(shù)雖較對照組仍有增加，但較模型組明顯減少，學習記憶能力明顯改善。 2.對照組大鼠海馬CA1區(qū)細胞排列整齊、均勻，細胞結構完整；模型組大鼠海馬CA1區(qū)細胞排列不均勻、結構紊亂不整齊、不清楚，神經元減少，至術后21天病理改變最顯著；GGA組大鼠不同時間點CA1區(qū)細胞較模型組排列相對整齊、均勻，結構也較其完整，神經元減少有所改善。 3.模型組大鼠腦組織切片剛

6、果紅染色，在海馬CA1區(qū)與齒狀回之間可見染色陽性的物質，周圍小膠質細胞相對較聚集，可能為Aβ沉積。對照組大鼠腦組織切片剛果紅染色未見Aβ沉積，GGA干預組切片亦未發(fā)現(xiàn)明顯的Aβ沉積。 4.模型組和GGA組大鼠術后1天海馬HSP70mRNA表達和蛋白表達和對照組比較差異無統(tǒng)計學意義；術后7天、14天、21天模型組大鼠海馬HSP70mRNA和蛋白表達較對照組逐步減少，差異具統(tǒng)計學意義；術后各相應時間點GGA組大鼠海馬HSP70mRN