冷應激仔豬四種組織中HSP70表達與其mRNA轉(zhuǎn)錄及激素變化規(guī)律.pdf

1、用14頭50日齡，體重為15kg±1kg的雄性“軍牧一號”仔豬進行冷應激試驗來探討HSP70及其mRNA隨著應激時間的變化而發(fā)生變化的規(guī)律及兩者之間的相關關系。仔豬正常飼養(yǎng)溫度為18℃。試驗前和期間自由采食和飲水，在-5℃～-10℃進行冷應激刺激。采樣時間分別為應激0h，0.5h，3h，6h，12h，24h，應激恢復0.5h，3h，6h，12h，24h，48h共12個時間點進行采樣。在每個時間點各屠宰一頭豬，取肝臟、脾臟和股二頭肌樣品并

2、迅速置于液氮中保存；每個時間點前腔靜脈各取抗凝血10mL，并迅速分離淋巴細胞，置于-84℃超低溫冰箱冷凍保存。 本試驗采用免疫印跡和實時定量RT-PCR方法檢測應激前后不同時間仔豬肝臟、脾臟、肌肉和淋巴細胞中HSP70的表達量及其mRNA的轉(zhuǎn)錄量，并采用放射免疫分析法測定應激前后不同時間血清中激素濃度，試驗數(shù)據(jù)均用SPSS軟件統(tǒng)計分析。結果如下：(1)正常狀態(tài)下，HSP70有一定的基礎表達量，應激0.5h，淋巴細胞內(nèi)HSP70的

3、表達水平迅速升高(p＜0.05)，但隨之逐漸下降。雖有波動趨勢，但變化并不顯著(p＞0.05)。應激6h，12h的HSP70的表達量與原始基礎量差異極顯著(p＜0.01)。應激恢復6h，HSP70的表達量又逐漸上升(p＜0.05)，至應激恢復24h后，表達量降到接近于基礎量水平。仔豬肝臟、脾臟和肌肉中HSP70的表達量都以不同的速度升高，而后呈現(xiàn)與淋巴細胞相似的變化趨勢。(2)在正常狀態(tài)下仔豬肝臟、脾臟、肌肉和淋巴細胞中HSP70mRN

4、A有一定的基礎轉(zhuǎn)錄量；冷應激0.5h，淋巴細胞內(nèi)HSP70mRNA轉(zhuǎn)錄量也迅速升高(p＜0.05)。冷應激3h，轉(zhuǎn)錄量下降但冷應激6h稍微上升。HSP70mRNA豐度在應激6h上升到一定程度后呈不斷下降的趨勢。直到應激恢復3h，轉(zhuǎn)錄量呈上升趨勢，到應激恢復24h，已經(jīng)達到峰值，到48h下降到基礎量水平。肝臟、脾臟、肌肉HSP70mRNA的總體變化趨勢與淋巴細胞HSP70mRNA相同。(3)血清促腎上腺皮質(zhì)激素濃度呈現(xiàn)先逐漸上升再下降的趨

5、勢，但變化不明顯(p＞0.05)。血清皮質(zhì)醇濃度在應激前后變化比較明顯。應激0.5h，血清皮質(zhì)醇濃度迅速升高(p＜0.05)。隨后逐漸下降，到應激恢復0.5h，血清皮質(zhì)醇濃度與應激3h相比差異顯著(p＜0.05)；與應激6h比較差異極顯著(p＜0.01)。甲狀腺激素分游離和結合型激素，其濃度變化曲線都呈先升高后降低的趨勢，血清中FT3與FT4的濃度變化與基礎濃度比較差異顯著(p＜0.05)，而T3和T4濃度變化不明顯(p＞0.05)。