動(dòng)物性中藥材地龍DNA條形碼的初步研究.pdf

1、目的:通過不同方法提取不同來源中藥材地龍的基因組總DNA并進(jìn)行比較,以確定提取中藥材地龍DNA提取的最佳方法。以通用引物對(duì)不同來源中藥材地龍DNA中線粒體細(xì)胞色素c氧化酶亞基Ⅰ基因(COⅠ)、16SrRNA基因(16SrDNA)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序、序列比對(duì)及數(shù)據(jù)分析,并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,為中藥材地龍的種屬鑒定提供可參考的分子標(biāo)記,初步建立動(dòng)物性中藥材地龍的DNA條形碼。
　　 方法:用三種不同方法對(duì)不同來源中藥材地龍的基因組

2、總DNA進(jìn)行提取,篩選出在中藥材地龍中最合適的DNA提取方法。用通用引物對(duì)中藥材地龍的COⅠ、16SrDNA片斷進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序;運(yùn)用DNAstar、DNAman、Geneious、ClustalX、MEGA等軟件對(duì)測(cè)序所得堿基序列進(jìn)行分析,并根據(jù)獲得的序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹;將獲得的中藥材地龍COⅠ、16SrDNA序列提交GenBank中的DNABarcoding數(shù)據(jù)庫。
　　 結(jié)果:確定了提取中藥材地龍DNA的一種合適方法;

3、優(yōu)化了中藥材地龍DNA中COⅠ和16SrDNA序列PCR擴(kuò)增的條件;獲得了不同來源中藥材地龍DNA中COⅠ和16SrDNA堿基序列;并經(jīng)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,對(duì)不同來源的中藥材地龍進(jìn)行了聚類分析;將獲得的中藥材地龍DNA中COⅠ和16SrDNA序列提交GenBank中的DNA條形碼數(shù)據(jù)庫,獲得了序列號(hào)。
　　 結(jié)論:所獲得的中藥材地龍COⅠ、16SrDNA序列可為動(dòng)物性中藥材地龍的分子水平鑒定提供參考;中藥材地龍DNA中COⅠ序列基因