四環(huán)素系統(tǒng)調(diào)控hTERT及Bcl-2基因shRNA的表達(dá)影響膀胱癌細(xì)胞惡性表型.pdf

1、背景及目的：膀胱癌是泌尿系統(tǒng)較常見的惡性腫瘤，也是人類十大常見腫瘤之一，具有發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高，易轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)。目前研究仍不能很好的解釋膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展，而膀胱癌的病因亦十分復(fù)雜，既與人體基因突變有關(guān)，也與外在環(huán)境因素有關(guān)。shRNA是由兩個(gè)短的反向重復(fù)序列和一個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)組成的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的shRNA經(jīng)Dicer酶剪切后形成siRNA，后者識(shí)別靶mRNA并引起靶mRNA的降解，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增

2、殖和凋亡等。hTERT是端粒酶的一個(gè)亞單位，該區(qū)域的基因突變能夠驅(qū)動(dòng)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。Bcl-2蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一員，編碼該蛋白的Bcl-2基因是一種原癌基因，與腫瘤的凋亡有密切關(guān)系。本研究主要探討由四環(huán)素開關(guān)調(diào)控的hTERT和Bcl-2基因的shRNA對(duì)人膀胱癌細(xì)胞惡性表型的影響。
　　方法與結(jié)果：構(gòu)建四環(huán)素開關(guān)調(diào)控靶向hTERT和Bcl-2基因的shRNA的質(zhì)粒，觀察其對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株5637和T24的轉(zhuǎn)染效果，利

3、用逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）分別測(cè)定四環(huán)素處理組和對(duì)照組中hTERT和Bcl-2 mRNA在膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，細(xì)胞劃痕法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實(shí)驗(yàn)和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核染色質(zhì)形態(tài)學(xué)改變?cè)u(píng)估細(xì)胞凋亡狀況。最后，成功轉(zhuǎn)染5637及T24細(xì)胞并以四環(huán)素處理48小時(shí)后，四環(huán)素處理組中hTERT和Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平下降，細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞遷移能力受到抑制，細(xì)胞凋亡率升高。而