基于四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)的TRE-C-imp13轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建及表達(dá)分析.pdf

1、由于真核細(xì)胞的基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄與蛋白質(zhì)的表達(dá)翻譯在細(xì)胞內(nèi)分區(qū)進(jìn)行，蛋白質(zhì)及核酸等生物大分子跨核膜轉(zhuǎn)運(yùn)成為細(xì)胞中最重要的生物學(xué)功能之一。importin-β家族蛋白介導(dǎo)的底物核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)是其中主要的機(jī)制。importin13(imp13)是這個(gè)家族成員之一，也是目前所知的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中唯一能雙向轉(zhuǎn)運(yùn)底物蛋白的蛋白質(zhì)。目前研究已發(fā)現(xiàn)importin13的底物有UBC9，Rbm8，Pax6，NF-YB/NF-YC，GR，myopodin，negat

2、ive cofactor2，CHRAC-15/17，p12/CHRAC-17和eIF-1A。這些底物大都與發(fā)育有關(guān)，因此，importin13可能在機(jī)體發(fā)育中有重要的生物學(xué)功能。 2004年，Tao等發(fā)現(xiàn)importin13T缺失了N端之后滯留在細(xì)胞質(zhì)；2006年和2008年Tao等發(fā)現(xiàn)C-impl3負(fù)調(diào)控importin13的轉(zhuǎn)運(yùn)功能；2006年，Yasuka等在小鼠睪丸中發(fā)現(xiàn)了importin13的另外一個(gè)轉(zhuǎn)錄本(TS-im

3、p13)，它包含Timportin13的第六個(gè)內(nèi)含子的75 bp及之后的C端的14個(gè)外顯子。他們推測(cè)TS-imp13可能對(duì)importin13轉(zhuǎn)運(yùn)功能起到負(fù)調(diào)控作用。最近，Giagtzoglou等發(fā)現(xiàn)，importin13可調(diào)節(jié)果蠅神經(jīng)肌肉連接中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，缺失importin13導(dǎo)致果蠅的視覺能力下降并在幼蟲階段死亡，說明importin13對(duì)神經(jīng)的功能和機(jī)體的發(fā)育有重要的功能。 為了研究importin13在發(fā)育過程，特

4、別是神經(jīng)發(fā)育過程中的作用，本研究構(gòu)建了N端缺失的C-impl3(a.a.450-963)轉(zhuǎn)基因小鼠TRE-C-imp13，并根據(jù)Tet-on系統(tǒng)原理，實(shí)時(shí)調(diào)控其表達(dá)。在100只出生動(dòng)物中，Genotyping檢測(cè)到27只含有TRE-C-imp13轉(zhuǎn)基因后代(27 founders)；RT-PCR和real-time PCR方法篩選出四個(gè)表達(dá)有C-imp13的founder，為今后研究importin13在發(fā)育過程中的作用提供了一個(gè)重要的