GPER通過MAPK-Erk-TRIM2信號軸降低凋亡蛋白Bim促進ER+乳腺癌他莫昔芬耐受.pdf

1、目的：研究GPER通過MAPK/Erk信號通路使Trim2高表達(dá)，從而降解凋亡蛋白Bim，促進他莫昔芬（tamoxifen）耐藥。
　　方法：通過免疫組化分析106例原發(fā)性乳腺癌及其經(jīng)他莫昔芬治療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的組織標(biāo)本中 Bim和 GPER的表達(dá)情況，并分析它們的關(guān)系。前期研究發(fā)現(xiàn)GPER及其下游信號通路在乳腺癌他莫昔芬耐受中起到重要的作用，并進行cDNA芯片分析發(fā)現(xiàn)TRIM2是GPER的下游基因，通過QRT-PCR、Western

2、 Blot檢測人乳腺癌細(xì)胞MCF-7及其他莫昔芬耐藥株MCF-7R中的Bim及TRIM2表達(dá)情況。應(yīng)用GPER特異性的激動劑G1及其特異性阻斷劑G15驗證芯片結(jié)果。小分子RNA干擾MCF-7中Bim基因并將Bim的cDNA導(dǎo)入MCF-7R后，再利用MTT和流式細(xì)胞術(shù)研究 Bim蛋白與乳腺癌細(xì)胞增殖及凋亡的關(guān)系。免疫共沉淀驗證 MCF-7R中TRIM2與Bim相互結(jié)合情況以及作用關(guān)系。利用MAPK/ERK信號通路的抑制劑U0126及PI3

3、k/AKT信號通路的抑制劑LY294002處理耐藥細(xì)胞，研究GPER調(diào)控TRIM2的分子機制。
　　結(jié)果：復(fù)發(fā)乳腺癌組織中Bim的表達(dá)水平明顯低于復(fù)發(fā)前組織（p<0.05），且Bim的表達(dá)與GPER有負(fù)相關(guān)性（p=0.0001）。耐藥細(xì)胞MCF-7R中Bim蛋白表達(dá)水平低于MCF-7細(xì)胞（p<0.05），且Bim是參與MCF-7R增殖與凋亡的重要因素。發(fā)現(xiàn)TAM作用于乳腺癌細(xì)胞后，Bim通過活化PARP和Caspase3使細(xì)胞凋亡

4、。MCF-7R細(xì)胞中TRIM2的表達(dá)水平明顯高于MCF-7細(xì)胞（p<0.05），且Trim2的表達(dá)受GPER/EGFR/Erk信號通路調(diào)控，并促使MCF-7R細(xì)胞中TRIM2與Bim緊密結(jié)合，使Bim蛋白量降低。干擾MCF-7R中的TRIM2后，Bim的蛋白量明顯升高且恢復(fù)其對他莫昔芬的敏感性。
　　結(jié)論：TAM激活GPER后，下游EGFR/ERK信號通路的活化使乳腺癌細(xì)胞中Trim2的表達(dá)升高，使其與促凋亡蛋白 Bim結(jié)合并促進