二甲雙胍調(diào)控Nrf2對(duì)非小細(xì)胞肺癌EGCG和放射敏感性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：二甲雙胍增加非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549對(duì)EGCG（表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯）的敏感性
　　目的：研究二甲雙胍對(duì)非小細(xì)胞肺癌 A549細(xì)胞表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸脂(EGCG)敏感性的影響及其機(jī)制。
　　方法：首先利用MTT法和Western Blot法檢測(cè)不同非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株對(duì)EGCG的敏感性差異以及細(xì)胞株中HO-1表達(dá)水平的差異；采用MTT法檢測(cè)二甲雙胍能否增加EGCG對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制；采用細(xì)胞凋亡試劑盒和R

2、OS檢測(cè)試劑盒明確二甲雙胍和EGCG對(duì)A549細(xì)胞凋亡和ROS水平的影響；分別采用Western Blot和免疫熒光檢測(cè)二甲雙胍和EGCG對(duì)HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響及對(duì)Nrf2在細(xì)胞內(nèi)亞分布的影響；通過(guò)分析基因芯片的結(jié)果和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)25對(duì)肺癌和正常肺組織中HO-1的表達(dá)水平了解正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中HO-1表達(dá)的差異，并采用MTT法分析EGCG對(duì)A549和正常肺上皮BEAS-2B細(xì)胞的影響。采用裸鼠皮下接種A549

3、細(xì)胞的方法建立A549細(xì)胞裸鼠移植瘤模型；二甲雙胍200μg/mL溶于飲用水給藥，EGCG50mg/kg隔天腹腔注射給藥。采用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠移植瘤的大小。采用免疫組化檢測(cè)裸鼠移植瘤中Nrf2水平的變化。
　　結(jié)果：四種不同的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中HO-1表達(dá)水平存在差異，A549中HO-1表達(dá)最高，同時(shí)A549對(duì)EGCG最為耐受。二甲雙胍能抑制A549細(xì)胞中HO-1的蛋白水平，并且這種抑制效果存在濃度依賴性，0.4mmol/L的二

4、甲雙胍對(duì) A549生長(zhǎng)沒(méi)有抑制效果，但是能顯著抑制 HO-1的蛋白水平。0.4mmol/L的二甲雙胍能顯著增加EGCG對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制，凋亡和ROS的水平。二甲雙胍能通過(guò)抑制Nrf2的細(xì)胞核分布降低HO-1的水平。最后通過(guò)分析基因芯片的結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比于肺癌組織，正常肺上皮中HO-1水平明顯增高，且正常肺上皮BEAS-2B相比于A549對(duì)EGCG更為耐受。二甲雙胍能增加EGCG對(duì)A549裸鼠移植瘤的抑制作用。EGCG能增加裸鼠移植瘤

5、中Nrf2的水平，二甲雙胍抑制EGCG增加Nrf2的效應(yīng)。
　　結(jié)論：本研究表明，二甲雙胍能抑制 A549細(xì)胞中HO-1的蛋白水平，并且能通過(guò)誘導(dǎo)凋亡和ROS的產(chǎn)生增加EGCG對(duì)A549生長(zhǎng)的抑制。二甲雙胍能夠通過(guò)抑制細(xì)胞核內(nèi)的Nrf2水平減少HO-1的水平。此外，正常肺上皮和肺癌中 HO-1的表達(dá)存在差異，因此對(duì) EGCG的敏感性不同。二甲雙胍聯(lián)合EGCG可以為臨床腫瘤治療提供了一個(gè)新方案。
　　第二部分：二甲雙胍對(duì)非小細(xì)

6、胞肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞放射敏感性的影響和機(jī)制研究
　　目的：研究二甲雙胍對(duì)非小細(xì)胞肺癌 A549細(xì)胞放射敏感性的影響及其機(jī)制。
　　方法：采用克隆形成法檢測(cè)二甲雙胍和 X射線對(duì) A549克隆形成的影響；采用 PI法檢測(cè)二甲雙胍和 X射線對(duì) A549細(xì)胞周期的影響；采用細(xì)胞凋亡試劑盒檢測(cè)二甲雙胍和X射線對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響；分別采用Western Blot和免疫熒光檢測(cè)二甲雙胍和X射線對(duì)HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響

7、及對(duì)Nrf2在細(xì)胞內(nèi)亞分布的影響。
　　結(jié)果：二甲雙胍能抑制X射線對(duì)A549細(xì)胞克隆形成的抑制能力；二甲雙胍能抑制S期細(xì)胞的比例，同時(shí)減少X射線誘導(dǎo)的G2/M期阻滯；二甲雙胍能減少X射線導(dǎo)致的Nrf2細(xì)胞核轉(zhuǎn)位。
　　結(jié)論：本研究表明，二甲雙胍能增加X(jué)射線抑制A549細(xì)胞克隆形成的能力，并且能通過(guò)改變A549的細(xì)胞周期并減少X射線誘導(dǎo)的G2/M期阻滯。此外，二甲雙胍能夠通過(guò)抑制X射線誘導(dǎo)的Nrf2細(xì)胞核轉(zhuǎn)位抑制Nrf2信號(hào)通