谷氨酰胺減弱LPS誘導(dǎo)牛睪丸支持細(xì)胞炎癥損傷的作用及其機(jī)制.pdf

1、雄性家畜常因發(fā)生睪丸炎而喪失生育能力，而脂多糖（LPS）是引起炎癥的關(guān)鍵細(xì)胞毒性因子，這也是人們?cè)谂R床研究中常用LPS制造炎癥模型的原因所在。此外，人類醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白72（HSP72）有明顯的抗炎癥作用，而谷氨酰胺（Gln）可誘導(dǎo)HSP72的表達(dá)。但是，Gln是否可調(diào)控HSP72表達(dá)從而減輕LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥損傷還不得而知。
　　試驗(yàn)觀察熱應(yīng)激、LPS、Gln誘導(dǎo)牛睪丸支持細(xì)胞（SCs）對(duì) HSP72表達(dá)情況的影響。試

2、驗(yàn)將傳至第3代的牛睪丸支持細(xì)胞分成熱應(yīng)激（37℃、39℃和41℃）及其對(duì)照（34℃）組，LPS（0、0.1、1、10、50和100μg/mL）和Gln（0、0.5、1、2、4和8 mmol/L）處理組，用CCK-8試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，39℃熱應(yīng)激1h、2 mmol/L的Gln和0.1μg/mL的LPS與細(xì)胞共培養(yǎng)12 h并恢復(fù)培養(yǎng)4h的條件下，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為8.22％，9.19%和5.80%。
　　用RT-PC

3、R和Western-Blot方法分別檢測(cè)上述條件39℃熱應(yīng)激1 h、0.1μg/mL LPS、2 mmol/L Gln處理后0、2、4、6、8、12、14和16 h時(shí)細(xì)胞內(nèi)HSP72 mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，三種處理方式均能誘導(dǎo)HSP72表達(dá)，且HSP72蛋白在熱應(yīng)激處理后2 h表達(dá)最高，HSP72蛋白在LPS處理后12h表達(dá)最高，Gln處理后4 h表達(dá)最高。
　　將培養(yǎng)的睪丸支持細(xì)胞隨機(jī)分為4個(gè)組，對(duì)照組為空白組，LPS組

4、為0.1μg/mLLPS刺激12 h組，Gln組為2 mmol/L的Gln預(yù)保護(hù)12 h組，LPS+Gln組為2 mmol/L的Gln預(yù)保護(hù)12 h后LPS刺激4 h組，運(yùn)用qRT-PCR、Western-Blot等方法分別檢測(cè)HSP72、IRAK-M、Tollip、A20、JNK、P38和p-P38的表達(dá)，ELISA檢測(cè)IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13和IL-17的表達(dá)。
　　結(jié)果顯示，與空白組相比，LPS

5、組IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13和IL-17的表達(dá)量顯著升高（P<0.05），LPS+Gln組與LPS組相比上述指標(biāo)表達(dá)量顯著降低（P<0.05）；同樣與空白對(duì)照組相比，LPS組 HSP72、IRAK-M、Tollip、A20、JNK、P38顯著升高（P<0.05），LPS+Gln組與LPS組相比上述指標(biāo)降低。
　　結(jié)論：根據(jù)熱應(yīng)激、Gln和LPS對(duì)牛睪丸支持細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率分別為8.22%，9.19%和5

6、.80%，選擇39℃熱應(yīng)激處理以及0.1μg/mL的LPS和2 mmol/L的Gln添加量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在39℃熱應(yīng)激處理?xiàng)l件下 HSP72 mRNA、蛋白的時(shí)效表達(dá)表達(dá)量最高的時(shí)間分別為0h、2h。2 mmol/L Gln的處理?xiàng)l件下HSP72mRNA、蛋白的時(shí)效表達(dá)表達(dá)量最高的時(shí)間分別為2 h、4 h。0.1μg/mL的LPS處理?xiàng)l件下，HSP72mRNA和蛋白的時(shí)效表達(dá)表達(dá)量最高的時(shí)間分別為10 h和12 h。Gln處理的炎癥反應(yīng)的S