蓽拔酰胺衍生物抗腫瘤活性評價及抗SK-N-SH細(xì)胞作用機(jī)制研究.pdf

1、蓽拔酰胺最早發(fā)現(xiàn)于胡椒科植物蓽拔的根部，據(jù)文獻(xiàn)報道它能夠提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平，進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞。因為蓽拔酰胺對正常細(xì)胞的損傷作用小，受到藥物研究人員的關(guān)注。但是由于蓽拔酰胺具有溶解性低，作用靶點不明的缺點，因此本課題組合成了一系列的蓽拔酰胺衍生物并對衍生物進(jìn)行活性評價及其作用機(jī)制的探討，以期改善不足，獲得活性更好，作用機(jī)制明確的抗腫瘤化合物。本研究論文的主要內(nèi)容如下：
　　選用MTT比色法對合成的51個蓽拔酰胺衍生物進(jìn)行體外

2、抗腫瘤活性篩選，涉及的腫瘤細(xì)胞株有：SGC7901，MGC803，EJ，EC109和SK-N-SH，首先對所有化合物進(jìn)行粗篩，將得到的活性較好化合物進(jìn)行3次細(xì)篩。研究結(jié)果表明對5種腫瘤細(xì)胞48 h IC50小于1μM的衍生物有2個，1~5μM的有11個，5~20μM的有3個。在所有衍生物中PL-C21對SK-N-SH的活性最突出，48 h IC50是280 nM，是蓽拔酰胺抗SK-N-SH活性的10倍。
　　對篩選最優(yōu)化合物PL-

3、C21進(jìn)行了SK-N-SH抗癌機(jī)制研究。采用染色法觀察凋亡小體，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期、凋亡、活性氧和線粒體膜電位水平，蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測與活性氧有關(guān)信號通路的蛋白，探索該化合物抗SK-N-SH細(xì)胞的作用機(jī)制。染色實驗觀察到早期凋亡細(xì)胞核皺縮，有的呈新月形緊挨著核膜；晚期凋亡細(xì)胞核破裂，呈大小不等圓形凋亡小體。流式細(xì)胞術(shù)檢測 PL-C21將SK-N-SH細(xì)胞阻滯于G2/M期；PL-C21誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞凋亡，并且相同的時間下凋亡

4、率隨著PL-C21濃度的增加而增加；PL-C21能夠升高SK-N-SH細(xì)胞內(nèi)活性氧水平和降低線粒體膜電位。當(dāng)加入活性氧抑制劑氮乙酰谷胱甘肽（NAC）后，能夠逆轉(zhuǎn)PL-C21引起的腫瘤細(xì)胞形態(tài)，周期，凋亡，活性氧和線粒體膜電位的變化。蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測PL-C21對SK-N-SH細(xì)胞信號通路的影響。PL-C21殺傷SK-N-SH細(xì)胞在相同的時間隨著藥物濃度的增加促凋亡蛋白 Bax、Bad表達(dá)量增加；活化后的Caspase3，Caspa

5、se9蛋白表達(dá)量增加；Caspase3的底物Active-PAPR蛋白表達(dá)量增加。因為ROS的產(chǎn)生與p38 MAPK有關(guān)。因此實驗中加入p38 MAPK信號通路的特異性抑制劑SB62005后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平及p38蛋白磷酸化水平被部分逆轉(zhuǎn)。所以，PL-C21殺傷腫瘤細(xì)胞可能與激活了MAPK通路有關(guān)。
　　綜上所述，通過活性篩選得到的最優(yōu)化合物PL-C21具有誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期，引起活性氧升高