MSCs促進(jìn)肝臟巨噬細(xì)胞向M2型極化治療急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)發(fā)生時(shí)，機(jī)體免疫系統(tǒng)過(guò)度激活，肝臟免疫微環(huán)境嚴(yán)重紊亂，致使肝細(xì)胞大量壞死，肝功能短期迅速喪失。肝臟巨噬細(xì)胞的可塑性和極化狀態(tài)，參與并維持了肝臟免疫微環(huán)境的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌的可溶性細(xì)胞因子可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用改善ALF時(shí)肝臟的免疫微環(huán)境。
　　目的:
　　通過(guò)在ALF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中外源性移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstem cells，

2、MSCs)以達(dá)到干預(yù)ALF時(shí)肝臟免疫微環(huán)境的目的。評(píng)價(jià)MSCs移植治療對(duì)ALF的作用效果，并檢測(cè)肝臟組織內(nèi)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)程度和極化狀態(tài)的改變。明確MSCs移植治療ALF的內(nèi)在分子機(jī)制以及巨噬細(xì)胞在維持肝臟免疫微環(huán)境內(nèi)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮的作用，進(jìn)一步探討MSCs移植治療與巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、極化狀態(tài)的關(guān)系。
　　方法:
　　通過(guò)藥物誘導(dǎo)小鼠ALF動(dòng)物模型，外源性移植小鼠MSCs細(xì)胞，生化分析儀檢測(cè)細(xì)胞移植治療后小鼠肝功能(ALT、AST、P

3、T、NH3)、蛋白芯片檢測(cè)小鼠體內(nèi)炎癥介質(zhì)的變化以及HE染色檢測(cè)組織病理的改變。通過(guò)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)篩選出細(xì)胞移植治療前后表達(dá)差異較大的炎癥介質(zhì)。另一方面運(yùn)用免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞移植治療前后肝臟組織中巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)程度和極化狀態(tài)的變化，并分析其與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝功能的相關(guān)性。然后，通過(guò)對(duì)MSCs細(xì)胞移植治療后差異表達(dá)的炎癥介質(zhì)進(jìn)行拮抗，觀察小鼠肝臟組織中巨噬細(xì)胞的變化。深入探討MSCs移植治療與巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度和極化狀態(tài)的關(guān)系以及其

4、Western blot檢測(cè)相應(yīng)信號(hào)通路的變化。同時(shí)，聯(lián)合臨床標(biāo)本的部分觀察指標(biāo)，驗(yàn)證巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度和極化狀態(tài)的臨床相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　首先，我們發(fā)現(xiàn)MSCs移植治療能夠顯著改善ALF小鼠的的肝功能，增強(qiáng)凝血功能，減輕組織損傷和肝細(xì)胞凋亡以及IL-1、IL-6和TNF-α等多種炎癥介質(zhì)的浸潤(rùn)。蛋白芯片結(jié)果提示MSCs移植治療前后ALF小鼠體內(nèi)多種抗炎因子表達(dá)顯著升高，其中IL-10尤為甚。流式細(xì)胞結(jié)果提示MSCs移植

5、前，ALF小鼠肝臟組織內(nèi)以M1型巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)為主;而MSCs移植后以M2型巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)為主，M2/M1的比例在移植后顯著升高，而且肝組織中巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)程度在MSCs細(xì)胞移植治療后也明顯減輕。AS101處理(IL-10抑制劑)MSCs后，MSCs移植治療的肝保護(hù)作用被拮抗，巨噬細(xì)胞恢復(fù)至肝衰竭狀態(tài)時(shí)以M1型為主導(dǎo)。MSCs移植治療肝衰竭小鼠原代巨噬細(xì)胞的Western blot檢測(cè)結(jié)果與移植治療前相比，STAT3、p-STAT3和Arg

6、-1表達(dá)明顯增高，iNOS表達(dá)下降。AS101處理組與MSCs移植組相比，STAT3、p-STAT3和Arg-1表達(dá)顯著下降，iNOS表達(dá)上升。細(xì)胞上清液中加入Stattic（STAT3抑制劑）后，與MSCs組相比，Stattic組巨噬細(xì)胞內(nèi)分泌的IL-10水平顯著降低。
　　結(jié)論:
　　MSCs旁分泌的IL-10可活化STAT3信號(hào)通路，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化，從而維持肝臟炎癥微環(huán)境內(nèi)穩(wěn)態(tài)，發(fā)揮肝保護(hù)作用。巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)