高遷移率族蛋白B1在急性胰腺炎腸粘膜屏障損傷中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、急性胰腺炎患者血清高遷移率族蛋白B1水平與腸粘膜屏障損傷的關(guān)系
　　目的：通過監(jiān)測(cè)血清高遷移率族蛋白B1（high-mobility group box B1，HMGB1）水平與急性胰腺炎患者腸粘膜屏障損傷的動(dòng)態(tài)變化，探討HMGB1在急性胰腺炎患者腸粘膜屏障損傷中的作用。
　　方法：選擇起病24h內(nèi)入我院的急性胰腺炎患者59名，根據(jù)病情分為輕癥急性胰腺炎（Mild Acute Pancreatitis，MAP）26

2、名、中度重癥急性胰腺炎（Moderately Severes Acute Pancreatitis,MSAP）17名、重癥急性胰腺炎（Severes Acute Pancreatitis,SAP）16名，選擇同時(shí)期入我院體檢的健康者（對(duì)照組）20名。分別于患者起病后24h、48h、72h抽取靜脈血，采用雙抗體夾心免疫發(fā)光法（ELISA）測(cè)定血清中HMGB1、TLR4(toll-like receptor4)、TLR9(toll-like

3、 receptor9)、TNF-α(tumor necrosis factor-alpha)、IL-6(interleukin6)、DAO(Diamine oxidase)水平。
　　結(jié)果：1、本實(shí)驗(yàn)中MAP、MSAP、SAP組血清中HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平在24h、48h均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），在48h達(dá)峰值后逐漸下降。在72h時(shí)間點(diǎn)，MAP組血清中HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平與對(duì)照組無

4、明顯差異（P＞0.05），但 MSAP、SAP組仍然明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。2、各時(shí)間點(diǎn)HMGB1、TLR4、TLR9、TNF-α、IL-6、DAO在各組中的水平依次為MAP＜MSAP＜SAP，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3、各時(shí)間點(diǎn)，MAP組中 TNF-α與對(duì)照組無差異；TNF-α在MSAP組24小時(shí)升高，48、72小時(shí)水平較前降低；TNF-α在SAP組24小時(shí)升高，48、72小時(shí)仍保持高水平。4、IL-6水平在MAP

5、、MSAP組于24小時(shí)升高，48、72小時(shí)降低；在SAP組中為48小時(shí)水平最高，72小時(shí)下降。5、在48h時(shí)間點(diǎn)，血清中HMGB1水平與血清DAO明顯相關(guān)（r＝0.942，P＜0.05）。
　　結(jié)論：HMGB1可能在急性胰腺炎患者腸粘膜損傷的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。
　　第二部分、高遷移率族蛋白B1對(duì)小鼠急性壞死性胰腺炎腸粘膜屏障損傷的作用及機(jī)制研究
　　目的：研究HMGB1在急性壞死性胰腺炎（acute necrotiz

6、ing pancreatitis,ANP）小鼠腸粘膜屏障損傷中的作用及可能的機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)采用腹腔內(nèi)注射13次雨蛙素（50μg/kg)+1次脂多糖（15mg/kg）誘導(dǎo)小鼠急性壞死性胰腺炎模型。選擇使用雄性KM小鼠24只，體重22-25g，完全隨機(jī)分為4組，6只/組。A組：ANP組。B組：ANP+HMGB1中和抗體組，造模完成后向腹腔內(nèi)注射抗HMGB1中和抗體（300μg）。C組：ANP+control IgY組，造模成

7、功后向小鼠腹腔內(nèi)注射control IgY（300μg/只）。D組：正常對(duì)照組。造模前12小時(shí)開始禁食，自由飲水。造模完成后12小時(shí)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取胰腺、小腸行HE染色后，進(jìn)行病理學(xué)觀察。分離血清，使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)小鼠血清中IL-1β, IL-6, TNF-α,DAO和內(nèi)毒素核心抗體（Endotoxin core antibody，EndoCAb）含量。使用TUNEL檢測(cè)法觀察腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡，測(cè)IOD值。West

8、ern blot檢測(cè)小腸組織中HMGB1、TLR4、TLR9、NF-κB（nuclear factor-kappa B）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、A、B、C組小鼠胰腺 HE染色均符合壞死性急性胰腺炎病理表現(xiàn)，第四組小鼠為正常胰腺。與A、C小鼠相比，B組小鼠胰腺病理評(píng)分得到改善。
　　2、A、C組小鼠小腸HE染色切片中可見部分小腸絨毛上皮下出現(xiàn)間隙，伴有毛細(xì)血管擴(kuò)張、淤血，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，少數(shù)可見固有層水腫、出血、

9、炎性細(xì)胞彌漫增多。B組小腸病理評(píng)分較A、C組有所下降。
　　3、A、B、C組小鼠血清中IL-1β, IL-6,TNF-α,DAO和內(nèi)毒素核心抗體含量均明顯高于第D小組（P＜0.05）。B組小鼠血清中上述指標(biāo)水平明顯低于A、C組小鼠（P＜0.05）。第A、C組小鼠所檢測(cè)的血清學(xué)指標(biāo)無明顯差異（P＞0.05）。
　　4、A、B、C組小鼠腸粘膜凋亡檢測(cè)的IOD值明顯高于第D小組（P＜0.05）。B組小鼠IOD值明顯低于A、C小鼠（

10、P＜0.05）。A、C小鼠的IOD值無明顯差異（P＞0.05）。
　　5、使用Western blot檢測(cè)各組小鼠腸道中HMGB1、TLR4、TLR9、NF-κB的表達(dá)，A、B、C組小鼠腸道中上述蛋白的表達(dá)均明顯高于第四小組（P＜0.05）。B組小鼠上述蛋白的表達(dá)低于A、C組小鼠（P＜0.05）。A、C組小鼠檢測(cè)的蛋白表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、HMGB1可能在ANP腸粘膜屏障損傷中發(fā)揮作用。