新型MIF小分子抑制劑的發(fā)現(xiàn)及其抗炎活性研究.pdf

1、巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)是一種關鍵的多功能蛋白質，在先天性免疫應答和適應性免疫應答反應中起著重要的調節(jié)作用。MIF作為一種促炎細胞因子，可以促進其它炎癥因子的釋放，拮抗糖皮質激素的免疫抑制作用，被認為是一個強有力的抗炎作用的靶點。此外，MIF還具有催化活性，MIF互變異構酶抑制劑在多種動物炎癥模型上顯示出良好的治療保護效果。因此，以MIF互變異構酶活性為靶點，開發(fā)新型小分子抑制劑成為一種重要的針對MIF相關疾病的治療策略。

2、　　本研究采用分子對接打分等計算機虛擬篩選方法從化合物庫中篩選出可能與MIF活性位點相結合的化合物，接下來通過酶活性測定實驗從中篩選出10個有效的酶活性抑制劑，其中有3個化合物（＃1，#2和#9）的IC50均比ISO-1（MIF典型抑制劑，IC50=14.4?M）低，尤其是#1的IC50已經(jīng)達到納摩爾級別（IC50=550 nM），抑制活性是已知的MIF抑制劑ISO-1的26倍。進一步的細胞實驗結果表明這三個化合物對MIF誘導的生物活性

3、包括糖皮質激素的免疫抑制，細胞趨化作用以及磷酸化ERK的激活也具有強烈的抑制作用，而且比ISO-1效果更為顯著。近年來發(fā)現(xiàn)神經(jīng)退行性疾病與膠質細胞激活誘導的炎癥有關，MIF酶活性抑制劑在外周巨噬細胞的抗炎保護作用已經(jīng)明確，但是對于神經(jīng)炎癥的作用尚未有報道，因此我們進一步研究了#1（命名為Z-590）在BV-2小膠質細胞激活產(chǎn)生神經(jīng)炎癥中的作用，結果顯示Z-590通過抑制MAPKs信號轉導通路可以顯著的抑制LPS誘導激活的BV-2小膠質細

4、胞中一氧化氮（NO），腫瘤壞死因子，白介素6（IL-6），白介素1?（IL-1?），環(huán)氧合酶（COX-2），誘導型一氧化氮合酶（iNOS）的產(chǎn)生以及 ROS的釋放，顯示出強有力的抗炎作用。此外，Z-590還可以顯著降低激活的BV-2小膠質細胞對周圍鄰近HT22海馬神經(jīng)元細胞產(chǎn)生的細胞毒性作用。實驗結果證明Z-590不僅可以顯著抑制MIF互變異構酶活性，對MIF的生物活性以及LPS介導神經(jīng)炎癥也具有強烈的抗炎保護作用。然而Z-590類似物

5、的構效關系及其內在活性還不清楚。因此，我們通過相似性搜索以及化學合成的方法，得到了Z-590的一系列類似物，其中有31個化合物的MIF酶抑制活性IC50均在10M以下，6個化合物在1?M以下。酶活性最強的#5（IC50=370 nM），不僅可以在體外抑制脂多糖（LPS）誘導的巨噬細胞的活化，顯著降低TNF-和IL-6等炎癥因子的產(chǎn)生，對于體內LPS引起的小鼠內毒素休克死亡也具有一定的保護作用，存活率在0.5mg/kg劑量時從0增加到35