APE1小分子抑制劑的篩選鑒定及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、APE1是一種多功能蛋白酶,具有DNA堿基切除修復(fù)、氧化還原生物等功能,是大分子功能復(fù)合體的一個(gè)范例。它在 DNA損傷修復(fù)和氧化還原信號(hào)調(diào)控等多個(gè)重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著主要作用。APE1在大多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)或胞漿異位表達(dá),被認(rèn)為是惡性腫瘤的重要標(biāo)志物。抑制APE1可顯著殺傷腫瘤細(xì)胞,同時(shí)極大地提高細(xì)胞對DNA損傷的敏感性。因此,APE1極有可能是增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療敏感性的有效作用靶點(diǎn)。最新研究發(fā)現(xiàn),APE1氧化還原抑制劑可以被用作

2、一個(gè)藥物單獨(dú)使用,也可作為一種具有潛在抗增殖或細(xì)胞毒性藥物與現(xiàn)有治療手段聯(lián)合使用,具有重要的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用價(jià)值。已發(fā)現(xiàn)大量的APE1小分子抑制劑,但這些化合物的研究都處于初級階段。本研究通過對中藥天然小分子化合物庫進(jìn)行虛擬篩選并結(jié)合體外活性篩選,以其獲得APE1特異的小分子抑制劑,為以APE1為靶點(diǎn)的分子靶向治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　目的:
　　篩選鑒定APE1的特異性小分子抑制劑,并研究其抗腫瘤活性。
　　方法:

3、　　1.基于APE1蛋白結(jié)構(gòu),運(yùn)用計(jì)算機(jī)虛擬篩選從中藥天然小分子化合物庫中發(fā)掘APE1的候選小分子抑制劑;
　　2.通過電泳遷移率實(shí)驗(yàn)對98種小分子化合物分子進(jìn)行活性篩選及鑒定;
　　3.AP內(nèi)切酶實(shí)驗(yàn)鑒定候選化合物對APE1損傷修復(fù)的抑制作用;
　　4.雙偏振極化干涉分析系統(tǒng)檢測APE1與候選抑制劑的相互作用;
　　5.CCK-8、荷瘤裸鼠實(shí)驗(yàn)研究棉酚抗腫瘤及協(xié)同順鉑化療作用。
　　結(jié)果:
　　1.

4、通過虛擬篩選,發(fā)現(xiàn)61個(gè)對APE1功能具有潛在抑制活性的小分子化和物,其中5個(gè)針對APE1的損傷修復(fù)功能,56個(gè)針對氧化還原功能。
　　2.通過電泳遷移率實(shí)驗(yàn)、AP內(nèi)切酶實(shí)驗(yàn)、雙偏振極化干涉分析,發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA、棉酚、依布硒通過與 APE1直接相互作用顯著抑制其氧化還原功能,其中棉酚還可顯著抑制APE1修復(fù)功能。
　　3.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明棉酚可顯著抑制宮頸癌腫瘤生長并可增強(qiáng)順鉑化療敏感性。
　　結(jié)論:
　　1.丹參