活性引導(dǎo)的兒茶素類CFTR抑制劑發(fā)現(xiàn)及分子藥理學(xué)研究.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：10165學(xué)號(hào)：201111203遣掌師筢大學(xué)碩士學(xué)位論文⑨活性引導(dǎo)的兒茶素類CFTR抑制劑發(fā)現(xiàn)及分子藥理學(xué)研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：陳磊細(xì)胞生物學(xué)通道病化學(xué)生物學(xué)楊紅教授2014年05月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要腸道內(nèi)適量的液體對(duì)消化和腸內(nèi)容物的清理是至關(guān)重要的，液體由血液中輸送至腸腔內(nèi)是被動(dòng)運(yùn)輸過(guò)程，主要是以Cl‘為主的陰離子驅(qū)動(dòng)完成的。囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)是ABC蛋白

2、家族成員，其主要功能是為氯離子的轉(zhuǎn)運(yùn)提供選擇性通道。霍亂弧菌和致病性大腸桿菌產(chǎn)生的外毒素能夠提高細(xì)胞內(nèi)cA_～I(xiàn)P水平來(lái)激活CFTR氯離子通道，誘導(dǎo)液體分泌過(guò)度引發(fā)分泌性腹瀉。因此，抑制CFⅡo氯離子通道開放是避免分泌過(guò)度的有效方法，CFTR抑制劑是治療分泌性腹瀉的潛在藥物。許多傳統(tǒng)中藥如狹葉紅景天(Rhodiolakirilowii(Regel)Maxim)，常常用來(lái)治療分泌性腹瀉，然而它們治療分泌性腹瀉的分子機(jī)制目前并不明確。系統(tǒng)的

3、研究狹葉紅景天中藥，將其活性成分與藥物靶標(biāo)CFTR之間的作用進(jìn)行比對(duì)，明確分子藥理學(xué)機(jī)制實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化。本研究通過(guò)活性引導(dǎo)的方法，從狹葉紅景天中篩選CFTR抑制劑。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)通過(guò)細(xì)胞熒光測(cè)定確定狹葉紅景天中具有CFTR抑制活性成分，運(yùn)用活性引導(dǎo)的分離方法，從中分離得到目標(biāo)化合物，通過(guò)質(zhì)譜學(xué)分析及標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，確定活性化合物為EGCG。(2)應(yīng)用細(xì)胞熒光測(cè)定方法進(jìn)一步研究?jī)翰杷仡愃莆顲、EC、ECG、EGC，從中發(fā)現(xiàn)ECG同樣具

4、有CFTR抑制活性。(3)FRT細(xì)胞熒光測(cè)定顯示EGCG和ECG對(duì)CFTR氯離子通道的抑制作用具有劑量依賴關(guān)系，EGCG的半抑制濃度IC50是100laM，ECG的IC50為200rtM，二者在高濃度時(shí)能100％抑制CFTR通道開放。并且不破壞細(xì)胞完整，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒副作用。(4)離體組織實(shí)驗(yàn)表明EGCG和ECG能影響大鼠結(jié)腸粘膜短路電流，EGCG和ECG能夠抑制結(jié)腸粘膜上的CFTR的氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)。(5)體內(nèi)活性實(shí)驗(yàn)顯示，在霍亂毒素引起的小鼠