喹乙醇誘導(dǎo)胰島細(xì)胞DNA操作及其機制探討.pdf

1、目的:喹乙醇(olaquindox)，是一種抗菌促生長劑，被廣泛應(yīng)用在禽畜和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，已有實驗表明喹乙醇對肝腎均有損害，但尚未有關(guān)于喹乙醇對胰島損害的研究，本實驗通過彗星實驗觀察喹乙醇是否會對大鼠胰島細(xì)胞的DNA有損傷并探討其損害可能的機制，通過westernblot實驗觀察喹乙醇對p53蛋白表達(dá)的影響，從而探討由持續(xù)DNA損傷可能引起的與癌有關(guān)基因表達(dá)的增加，為更全面的評估喹乙醇多臟器的損害提供依據(jù)。
　　 方法:喹乙醇引起

2、的DNA損傷是通過單細(xì)胞凝膠電泳實驗檢測，用2'7'-二氫二氯熒光素(DCFH)檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量，用吖啶橙(AO)檢測細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性，通過辣根過氧化物酶標(biāo)記的熒光指示劑來檢測westernblot實驗中P53蛋白表達(dá)量，通過堿性保護(hù)劑NH4Cl和NAC來干預(yù)彗星實驗及分別干預(yù)溶酶體實驗和ROS實驗。
　　 結(jié)果:喹乙醇(0～1600ug/ml)作用于INS-1細(xì)胞1h后，彗星實驗中尾長、尾距、尾DNA％含量均

3、增加，并呈劑量依賴，在對800、1600ug/ml劑量組分別加NH4Cl和NAC干預(yù)后均有保護(hù)作用。喹乙醇同樣作用于INS-1細(xì)胞1h，可使細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性下降、ROS含量增加，分別用NH4Cl和NAC干預(yù)后均有保護(hù)作用。喹乙醇分別作用于INS-1細(xì)胞24h和48h后，P53蛋白表達(dá)量增加。
　　 結(jié)論:喹乙醇可以誘導(dǎo)大鼠胰島細(xì)胞DNA損傷，對大鼠胰島細(xì)胞有遺傳毒性，NAC和NH4Cl均可對喹乙醇所致的DNA損傷起到保護(hù)作用