鈉氫交換蛋白在DNA損傷誘導(dǎo)細胞凋亡中的作用及其機制的初步研究.pdf

1、目的：本研究通過比較Etoposide及放射線照射對K562、HL-60、Jurkat細胞的鈉氫交換蛋白（Na+/H+exchanger1，NHE1）表達水平及細胞內(nèi)pH值（intracellularpH，pHi）的影響，探討在依托泊苷誘導(dǎo)細胞凋亡過程中NHE1表達變化及其調(diào)控凋亡過程的機制。
　　 方法：應(yīng)用Etoposide處理或照射5Gy放射劑量K562、HL-60、Jurkat細胞，誘導(dǎo)細胞凋亡。分別采用實時定量RT-P

2、CR技術(shù)及Western blot檢測物理化學(xué)因素所至DNA損傷對NHE1的tuRNA表達水平和蛋白表達水平的影響。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡測定K562、HL-60、Jurkat細胞pHi的變化。應(yīng)用DNA片段化檢測和遠末端缺口標(biāo)記（NUNEL）法分析細胞凋亡。同時應(yīng)用NHE1特異抑制劑卡立泊來德（Cariporide）作用于K562、HL-60細胞，比較二種細胞凋亡及p Hi的變化。
　　 結(jié)果：Etoposide作用24小時后能

3、有效地誘導(dǎo)BCR/ABL陰性的HL-60、Jurkat細胞凋亡，但對BCR/ABL陽性的K562細胞卻沒有明顯的誘導(dǎo)凋亡的作用。放射線照射也只能有效的誘導(dǎo)HL-60、Jurkat細胞凋亡，而對K562細胞也沒有明顯地誘導(dǎo)凋亡的作用。Etoposide和放射線照射能使HL-60、Jurkat細胞中NHE1 mRNA水平和蛋白水平表達先后上調(diào)。處理6小時之后，隨著NHE1蛋白表達水平增高，HL-60、Jurkat細胞pHi升高。經(jīng)NHE1特

4、異性抑制劑卡立泊來德預(yù)處理的細胞，再用依托泊苷處理24h之后，由于pHi沒有明顯升高，細胞凋亡率的升高幅度明顯降低。
　　 結(jié)論：Etoposide及放射線照射都能使BCR/ABL陰性的細胞的NHE1 mRNA轉(zhuǎn)錄增加，NHE1的蛋白表達上調(diào)，誘導(dǎo)出非常明顯的細胞凋亡，這種細胞凋亡結(jié)果依賴于NHE1表達量升高導(dǎo)致的細胞pHi升高。而這些物理和化學(xué)因素刺激卻不能使BCR/ABL陽性細胞的NHE1表達增高，誘導(dǎo)的細胞凋亡作用也明顯減