外燥傷肺的分子機(jī)制研究.pdf

1、外燥為中醫(yī)學(xué)特有的概念，是中醫(yī)基礎(chǔ)理論病因病機(jī)部分外感六淫之一，始載于《內(nèi)經(jīng)》，后世醫(yī)家亦多有論述，或表其象，或辨其性，或論其方，散載于各類病案及一些理論著作之中。外燥邪氣致病廣泛，但由于其特性不如風(fēng)、寒、暑、熱等邪氣明顯，且易與寒、熱、風(fēng)等邪氣夾雜致病，臨床癥狀常有寒溫兩種性質(zhì)，不易與寒、熱邪氣鑒別，故對外燥致病的研究不如寒熱等邪氣全面、深入。本課題擬在已完成的研究基礎(chǔ)上，就外燥概念的辨析，歷代醫(yī)家對外燥的論述、外燥的自然特性及產(chǎn)生、

2、外燥的季節(jié)性、外燥的地域性、外燥的陰陽屬性、外燥的致病特點、外燥的傳變規(guī)律及病機(jī)演變、肺臟相關(guān)理論及氣象醫(yī)學(xué)相關(guān)研究進(jìn)行了探討，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行實驗研究，依據(jù)外燥的自然特性，建立模擬自然條件下外燥模型，以外燥對模型小鼠肺表面活性物質(zhì)DPPC、SP-A、SP-D，支氣管及肺上皮細(xì)胞核因子NF-κ B，肺組織黏液基因MUC5AC的影響為切入點，深入研究外燥傷肺的分子機(jī)制，為中醫(yī)學(xué)外燥傷肺理論提供更高水平的科學(xué)實驗依據(jù)。并對豐富中醫(yī)六淫病因?qū)W

3、研究和指導(dǎo)中醫(yī)臨床起到積極促進(jìn)作用。
　　 理論研究:
　　 查閱相關(guān)資料，歸納總結(jié)外燥的各項特性。中醫(yī)學(xué)“燥”的概念，是在對“燥”這一現(xiàn)象的長期認(rèn)識和觀察的基礎(chǔ)上，基于取類比象的思維而形成的。因此很難作出精確的、單一的定義，應(yīng)該從病因、病機(jī)、癥狀等不同方面分析、理解。古代醫(yī)家將空氣干燥時的自然現(xiàn)象與人體發(fā)病后的癥狀特點進(jìn)行類比，總結(jié)出了凡是與干燥氣候有關(guān)的、具有干燥枯澀、損傷津液、容易侵犯肺臟等特點的致病因素，就是“燥

4、邪”?！霸铩笔亲匀唤顼L(fēng)、寒、暑、濕、燥、火六氣之一，而六氣是自然界陰陽二氣運動變化的結(jié)果。外燥的產(chǎn)生與年份、季節(jié)、地域等密切相關(guān)。根據(jù)五運六氣理論，金運太過之年“燥氣流行”，容易出現(xiàn)燥氣發(fā)生過強、變化過快的情況，產(chǎn)生燥邪致病的情況；木運不及之年木運不及，金克木，所以“燥乃大行”，燥邪致病的情況也比較容易發(fā)生。隨著社會生產(chǎn)力的發(fā)展，外燥的產(chǎn)生有了新的內(nèi)容，人為的“外燥”日益增多?，F(xiàn)代社會空調(diào)的普及率越來越高，人們在享受清涼的同時，更容易產(chǎn)

5、生一個小的“外燥”環(huán)境。外燥以秋季為主，四季皆有；于方域則西旺，四方四隅皆可見燥。歷代對外燥陰陽屬性爭議頗多，有分屬陰、陽和兩者皆而有之幾種觀點。外燥邪氣致病，其主要致病特點有五：病變以肺經(jīng)為主、易傷津液、易從火化、易克伐肝氣、易滯澀氣機(jī)。外燥侵入人體遵循由外入內(nèi)、由上到下、由氣及血的傳變規(guī)律，根據(jù)其性質(zhì)的寒溫分別有不同的癥狀?！秲?nèi)經(jīng)》提出“燥者濡之”總則和“治以苦溫，佐以甘辛，以苦下之”的治療大法，后世醫(yī)家在此基礎(chǔ)上多有發(fā)揮。內(nèi)燥和外

6、燥是兩個既相互區(qū)別、又緊密聯(lián)系的概念。區(qū)別主要有：概念屬性不同、證候性質(zhì)不同、臨床表現(xiàn)不同；聯(lián)系主要有兩點：兩者在發(fā)病過程中相互影響、臨床表現(xiàn)上相互關(guān)聯(lián)。
　　 本課題搜集、整理、分析了歷代中醫(yī)文獻(xiàn)中“外燥”的相關(guān)內(nèi)容，對外燥的概念、季節(jié)性、地域性、陰陽屬性、致病特點、傳變規(guī)律、自然特性及其產(chǎn)生、治療進(jìn)行了歸納總結(jié)，比較系統(tǒng)地完成了中醫(yī)學(xué)“外燥”理論研究。
　　 實驗研究:
　　 方法:
　　 各組小鼠在

7、人造氣候箱內(nèi)，參照相關(guān)文獻(xiàn)，采用“溫度-濕度-風(fēng)”綜合刺激法建立模型，實驗條件由人工氣候箱精確控制。各組分別在第6、12、18天麻醉、脫臼處死動物后，取標(biāo)本-80℃冰箱備用。
　　 1.肺組織MUC5Ac基因表達(dá)采用實時熒光定量PCR法檢測。
　　 2.肺組織NF-κ B基因表達(dá)采用實時熒光定量PCR法檢測。
　　 3.支氣管NF-κ B活性采用蛋白免疫印跡(Western blotting)法檢測4.肺泡灌洗液

8、中SP-A含量采用定量ELISA法檢測5.肺泡灌洗液中SP-D含量采用定量ELISA法檢測6.肺泡灌洗液中DPPC含量采用高效液相法檢測。
　　 結(jié)果:
　　 1.MUCSAC基因表達(dá)。常溫常濕組各時項MUC5AC基因表達(dá)顯著低于其它各組(P<0.01)，溫燥組、涼燥組第12天，第18天MUC5AC基因表達(dá)高于各自的第6天表達(dá)(P<0.01)，而且常溫燥組第18天MUC5AC基因表達(dá)低于其第12天表達(dá)水平，高于其第六天水

9、平。
　　 2.NF-κ B基因表達(dá)。溫燥與涼燥組各時相NF-κ B基因表達(dá)顯著低于常溫常燥組(P<0.01)，溫燥組各時相NF-κ B基因表達(dá)與常溫燥組相比較有所降低(P<0.05)，燥組第12天，第18天基因表達(dá)高于常溫燥組，第6天表達(dá)明顯增高(P<0.01)。
　　 3.NF-κ B活性。涼燥組第6天、第12天、第18天肺組織NF-κ B活性均低于常溫常濕組(P<0.01)，常溫燥組第12天，第18天NF-κ B活

10、性亦低于正常組(P<0.01)。溫燥組、涼燥組第6天NF-κ B活性均低于常溫燥組，而第12天、第18天則無明顯差異。
　　 4.SP-A含量。溫燥組及涼燥組在第6天、第12天、第18天SP-A含量均高于常溫常濕組(P<0.01)，，而常溫燥組各時相SP-A含量均顯著高于常溫常濕組(P<0.01)。溫燥組與涼燥組SP-A含量第6天、第12天無差異。
　　 5.SP-D含量。溫燥組及涼燥組在第6天、第12天、第18天SP-

11、D含量均高于正常組(P<0.01)，溫燥組、涼燥第6天、第12天SP-D含量高于常溫燥組(P<0.05)，溫燥組第18天SP-D含量高于常溫燥組(P<0.05)，而涼燥組含量與常溫燥組無差異。
　　 6.DPPC含量。溫燥組，涼燥組DPPC含量與正常組相比明顯減少(P<0.01)，溫燥，涼燥兩組相比較無差異。溫燥組第6天，涼燥組第6天、第18天DPPC含量高于常溫燥組(P<0.05)，溫燥組第12天，第18天涼燥組第12天DPP

12、C含量顯著高于常溫燥組(P<0.01)，涼燥組第12天、第18天，涼燥組第12天DPPC含量顯著高于常溫燥組(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.不同類別的外燥邪氣侵犯小鼠后，小鼠的MUC5AC基因表達(dá)均上調(diào)，并存在程度上的差異。說明不同類別的外燥邪氣侵犯小鼠肺臟后，肺不能通條水道，津液滯留成為痰飲。
　　 2.各造模條件及時相下，小鼠支氣管NF-κ B基因表達(dá)下調(diào)，其程度隨時間延長而增加，提示外燥邪氣傷肺

13、，損傷正氣。
　　 3.外燥邪氣侵襲小鼠肺臟，導(dǎo)致其NF-κ B活性降低，免疫功能下降，其中溫燥與涼燥對NF-κ B活性的影響并無差異。
　　 4.外燥襲肺，小鼠肺泡Ⅱ型細(xì)胞和氣道Clara細(xì)胞增加了SP-A的合成與分泌，用于抵御外燥邪氣對肺臟的損傷。
　　 5.在不同溫度濕度空間的外燥模型條件刺激下，小鼠SP-D的合成與分泌增加，提示外燥傷肺后，機(jī)體鼓舞正氣抵御外邪。
　　 6.外燥模型條件下，溫燥組，