外寒傷肺的理論和實驗研究.pdf

1、寒邪是六淫之中常見的致病因素。寒邪由外而入者,稱之為外寒。外寒易傷肺致病,《黃帝內經》中有“形寒寒飲則傷肺”、“肺惡寒”等經典理論。檢索國內近20年的相關文獻,關于寒證的研究較多,而從病因學的角度系統(tǒng)研究寒邪及其致病機理的較少,且研究不夠深入。本課題擬在中醫(yī)學病因病機理論的指導下,在對寒邪進行理論回顧基礎上,模擬溫度、時間等作用因素,制作外寒傷肺的動物模型,以肺臟作為研究的靶器官,觀察六淫寒邪對小鼠肺臟通調水道、衛(wèi)外等機能的影響,并通過

2、檢測肺部AQP-1、BAFF、NF-κB表達的改變,探討寒邪傷肺的可能分子機制,為六淫寒邪病因病機理論提供客觀的科學實驗數(shù)據(jù),并為臨床辨證論治提供新的思路和量化檢測指標。本課題具有理論創(chuàng)新和一定的臨床指導價值。
　　 1.理論研究
　　 寒是六氣之一,乃冬季之主氣,是大自然正常的氣候變化,正常的寒氣并不致病,若氣候變化異常,寒氣過重,傷人正氣,致人疾病,這種“不正之寒氣”中醫(yī)學上稱之為寒邪(淫),寒邪并不僅僅是一個單純的

3、異常氣候因素,應該還包括物理、化學因素、氣象因素、生物致病因子等,且與機體的體質、反應性甚或某些基因的表達密切相關。
　　 肺位于胸腔,左右各一,為臟腑之華蓋,百脈之朝會,主氣司呼吸,具有宣發(fā)肅降之生理特性。通過宣發(fā)肅降,通調水道,對體內水液的輸布、運行和排泄起著疏通和調節(jié)作用;通過宣發(fā)衛(wèi)氣于體表,實現(xiàn)衛(wèi)外御邪的功能。
　　 《黃帝內經》記載有:“肺惡寒”、“形寒寒飲則傷肺”、“重寒傷肺”,肺惡寒與肺的生理特性密切相關。

4、肺臟通過鼻竅與外界直接相通,且肺臟清虛嬌嫩,在中醫(yī)學上被稱之為“嬌臟”,不耐寒襲,肺臟主身之皮毛,皮毛受寒,亦可內合于肺。
　　 外寒傷肺的基本病機為肺陽受損。肺陽是肺氣中具有溫煦、推動、宣發(fā)等作用的部分。寒為陰邪,易傷陽氣。寒邪客于肺,可使肺陽受損,肺失宣降,肺行水功能障礙,肺內水液停驟為飲;衛(wèi)氣不能輸布于體表,衛(wèi)外功能障礙,導致衛(wèi)外不固。
　　 2.實驗研究
　　 2.1實驗動物及分組
　　 SPF級

5、昆明種小鼠50只,體重17±1g,雌雄各半。常規(guī)飼養(yǎng)7天后隨機分為7組:①常溫對照組,②4℃7天組,③4℃14天組,④0℃7天組,⑤0℃14天組,⑥0℃7天藥物治療組,⑦4℃7天藥物治療組。
　　 2.2實驗藥物
　　 甘草干姜湯加麻黃,組成:甘草30g、干姜30g、麻黃20g。將上述三種中藥混合經水煎煮、過濾、濃縮,配制成每毫升含生藥0.2g的水煎劑,裝瓶后置于4℃冰箱密閉保存?zhèn)溆?br>　　 2.3指標檢測

6、　　 2.3.1一般情況觀察
　　 觀察小鼠的神態(tài)、活動量、口唇耳色澤,皮毛情況以及食量、體重的改變情況。
　　 2.3.2小鼠肺組織結構觀察
　　 采用蘇木素伊紅(眥)染色法,光鏡觀察。
　　 2.3.3肺濕干重比值(W/D)計算
　　 W/D=肺濕重/烘干后重量。
　　 2.3.4肺組織AQP-1表達的測定
　　 采用Western blot法檢測。
　　 2.3.5

7、血清IgG和呼吸道液IgG的檢測
　　 采用ELISA試劑盒檢測。
　　 2.3.6肺組織BAFF表達的檢測
　　 采用實時定量熒光PCR檢測。
　　 2.3.7肺組織NF-κB表達的檢測
　　 采用Western blot法檢測。
　　 2.4統(tǒng)計學處理
　　 數(shù)據(jù)采用-X±S表示,以SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,采用采用方差分析和t檢驗進行統(tǒng)計學處理,P＜0.05為差異

8、有統(tǒng)計學意義。
　　 3.結果
　　 4℃7天組、4℃14天組,0℃7天組、0℃14天組小鼠造模期間口唇、耳朵、尾巴顏色逐漸變蒼白,活動量減少,體重增幅減小,部分小鼠體重逐漸減輕,消瘦明顯,食量減少。肺組織病理切片顯示4℃7天組、0℃7天組小鼠肺組織水腫充血,肺泡腔內有大量水液潴留,并可見炎癥細胞浸潤,以上結果符合寒邪傷肺的證候學特點,且肺部病變明顯,說明成功復制了外寒傷肺動物模型。
　　 稱量小鼠肺臟的干濕重量

9、,發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比,4℃7天組、0℃7天組小鼠肺組織濕干重比值升高(P＜0.05)。采用Western blot法檢測肺組織AQP-1,發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比,4℃7天組、0℃7天組小鼠肺組織AQP-1的表達水平下降,提示外寒可能通過下調AQP-1的表達影響肺的通調水道功能。
　　 ELISA法檢測外寒小鼠IgG-S和IgG-R的濃度發(fā)現(xiàn),與正常組相比,4℃7天組、4℃14天組,0℃7天組、0℃14天組小鼠IgG-S和IgG-