運(yùn)用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)鑒定干擾素的亞型.pdf

1、目的：研制干擾素(interferon，IFN)單克隆抗體，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。采用自制和惠贈(zèng)的干擾素單克隆抗體，在本實(shí)驗(yàn)室建立的金基底蛋白質(zhì)芯片平臺(tái)上對(duì)IFN-α 1b、IFN-α 2a、IFN-α 2b、IFN β及IFN γ進(jìn)行鑒定。方法：采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，以rIFN-α 2b為抗原，免疫Balb/c小鼠，取脾細(xì)胞與SP2/0，經(jīng)PEG融合，在HAT選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周，用ELISA方法鑒定陽(yáng)性克隆、有限稀釋法篩選單

2、克隆細(xì)胞株，并對(duì)其進(jìn)行特性分析：分析染色體核型；用Sigma公司的鼠單抗定型ImmunotypeTM試劑盒進(jìn)行亞型分析；用Westen blot方法檢測(cè)單克隆抗體的特異性；用間接ELISA方法，測(cè)定了相對(duì)親和常數(shù)。金基底蛋白質(zhì)芯片用已知亞型的IFN半成品包被，封閉后與自制和惠贈(zèng)的6株干擾素單抗反應(yīng)，再與Cy3-羊抗鼠IgG反應(yīng)，反應(yīng)后GenePix4100A芯片掃描儀掃描讀數(shù)，將結(jié)果與ELISA法、Western blot法比較。同樣方