利用激光顯微切割聯(lián)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變性亞型.pdf

1、背景和目的：
　　系統(tǒng)性淀粉樣變性是一組由于含有反向平行β折疊片結(jié)構(gòu)的蛋自在細(xì)胞外組織中沉積，進(jìn)而造成心臟、肝臟、腎臟、骨髓、外周神經(jīng)等器官功能不全的異質(zhì)性疾病。目前普遍采用依據(jù)致病蛋白種類對(duì)淀粉樣變性進(jìn)行分型的原則，各類亞型的預(yù)后及治療方案都不盡相同。但是，臨床廣泛應(yīng)用的分型方法如免疫熒光和免疫組化法存在商品化抗體數(shù)量有限或抗體結(jié)合表位喪失等問(wèn)題，檢測(cè)的敏感性和特異性均較低。國(guó)外已有少數(shù)研究顯示，質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)方法可成功應(yīng)用于淀

2、粉樣變性的分型。激光顯微切割聯(lián)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)(LMD/MS)技術(shù)不僅能夠?qū)崿F(xiàn)快速準(zhǔn)確的分型，同時(shí)可全面反映病變部位的蛋白構(gòu)成，有利于深入發(fā)病機(jī)制研究。
　　本研究的主要目包括:
　　(1)建立利用LMD/MS技術(shù)鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變性亞型的方法;
　　(2)利用LMD/MS方法對(duì)我院近13年的系統(tǒng)性淀粉樣變性病例進(jìn)行亞型診斷。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)標(biāo)本來(lái)自于2000年1月至2013年3月北京協(xié)和醫(yī)院病理確診

3、的系統(tǒng)性淀粉樣變性病例。通過(guò)北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會(huì)審查后，收集患者病變部位的福爾馬林固定石蠟包埋病理標(biāo)本。對(duì)已采集的標(biāo)本進(jìn)行切片、脫蠟、染色處理，利用激光顯微切割系統(tǒng)獲取剛果紅染色陽(yáng)性的淀粉樣變性病變區(qū)域，之后完成蛋白提取、酶切、多肽萃取、質(zhì)譜檢測(cè)、數(shù)據(jù)庫(kù)搜索和數(shù)據(jù)分析，明確病變區(qū)域的具體蛋白構(gòu)成，進(jìn)而確定淀粉樣變性亞型。
　　結(jié)果：
　　本研究的72例淀粉樣變性病例中有65例通過(guò)LMD/MS方法獲得了明確的診斷結(jié)果，分型成

4、功率為90.3％。7例病例因顯微切割失敗導(dǎo)致分型失敗。1例病例經(jīng)LMD/MS檢測(cè)排除了淀粉樣變性診斷。陽(yáng)性對(duì)照組中的16例病例的LMD/MS分型結(jié)果亞型符合率為100％。64例成功分型的病例包括AL-κ型24例(37.5％)，AL-λ型33例(51.6％)，ATTR型4例(6.2％)，AA型2例(3.1％)和AH型1例(1.6％)。本研究中有8例患者接受過(guò)免疫組化法分型，其中只有3例有明確診斷結(jié)果，與LMD/MS分型結(jié)果相比較，僅1例的

5、亞型診斷正確。因此，免疫組化法的分型準(zhǔn)確性僅為12.5％。31例存在單克隆免疫球蛋白血癥的病例經(jīng)LMD/MS檢測(cè)均屬于AL型淀粉樣變性，未發(fā)現(xiàn)其他亞型合并單克隆免疫球蛋白血癥。有2例病例的血清免疫固定電泳結(jié)果為陰性，但血清游離輕鏈檢測(cè)提示存在單克隆輕鏈，且輕鏈類型與LMD/MS分型結(jié)果相符。
　　結(jié)論：
　　利用LMD/MS技術(shù)鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變性亞型的敏感性及特異性均較高，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)免疫學(xué)檢測(cè)手段。該方法可作為系統(tǒng)性淀粉