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文檔簡(jiǎn)介
1、MicroRNA是一種內(nèi)源性小分子非編碼RNA,廣泛存在于真核生物中并參與調(diào)控各類細(xì)胞進(jìn)程。大量研究表明,miRNA參與了雞胚生長(zhǎng)發(fā)育、神經(jīng)細(xì)胞和肌肉細(xì)胞的增殖和分化、細(xì)胞遷移、性成熟和免疫應(yīng)答等一系列生命活動(dòng),對(duì)肉雞的生長(zhǎng)、發(fā)育和代謝具有重要的調(diào)控作用。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期成果的基礎(chǔ)上,篩選出miR-223作為研究肉雞生長(zhǎng)性能的候選基因,并以miR-223為切入點(diǎn),一方面探索miR-223在骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育中的生物學(xué)功能,另一方面研究mi
2、R-223及其靶基因作用于骨骼肌細(xì)胞增殖和分化的分子機(jī)理。論文主要結(jié)果如下:
1.通過(guò)qRT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)miR-223在雞胚肌肉發(fā)育過(guò)程中呈先上升后下降的趨勢(shì),其中,在肌肉快速發(fā)育的12E-17E高表達(dá),說(shuō)明miR-223參與雞胚的肌肉發(fā)育。
2.通過(guò)成肌細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) miR-223在成肌細(xì)胞分化過(guò)程中持續(xù)極顯著上升,說(shuō)明miR-223可能對(duì)成肌細(xì)胞的分化具有重要調(diào)控功能。
3.通過(guò)流式細(xì)
3、胞術(shù)、CCK-8和qRT-PCR檢測(cè)過(guò)表達(dá)和干擾miR-223的成肌細(xì)胞,結(jié)果表明:miR-223在成肌細(xì)胞中具有抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞分化的功能。
4.利用生物信息學(xué)分析和參考文獻(xiàn)報(bào)道,預(yù)測(cè)與細(xì)胞增殖分化相關(guān)的IGF2基因和 ZEB1基因?yàn)?miR-223的靶基因,并通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)、qRT-PCR和western blot等試驗(yàn),確定miR-223能夠靶向抑制IGF2和ZEB1基因的表達(dá)。
5.過(guò)表達(dá)和
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