miR-20a-106b對成肌細胞增殖和分化作用的研究.pdf

1、microRNAs在骨骼肌發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用?；蛐酒芯堪l(fā)現(xiàn)miR-20a和miR-106b在成肌分化過程中有動態(tài)表達，但其對肌原細胞增殖和分化的調(diào)節(jié)機制尚不明確。生物信息學分析預測miR-20a和miR-106b分別可能結(jié)合到生肌調(diào)節(jié)因子Myf5和Akt3基因mRNA的3'非編碼區(qū)(3'-UTR)，進而對成肌分化進行調(diào)控。本文利用肌原細胞C2C12建立體外成肌分化模型，深入探討了miR-20a通過調(diào)控Myf5表達和miR-

2、106b通過調(diào)控Myf5/Akt3表達進而影響肌原細胞增殖和分化的分子機制。取得研究結(jié)果如下:
　　1.BHK-21細胞中轉(zhuǎn)染miR-20a和miR-106bmimics可下調(diào)包含有Myf53'-UTR的雙熒光素酶報告載體的酶活性，而當載體中miR-20a和miR-106b種子序列發(fā)生突變或細胞內(nèi)miR-20a和miR-106b的表達被抑制后，雙熒光素酶活性得到了回復。在C2C12細胞中超表達miR-20amimics可抑制MYF

3、5蛋白的表達，若同時轉(zhuǎn)染miR-20ainhibitor則可回復其表達水平。這些結(jié)果表明miR-20a能作用于Myf5mRNA的3'-UTR，下調(diào)Myf5的表達;miR-106b能作用于Myf5mRNA的3'-UTR。
　　2.BHK-21細胞中轉(zhuǎn)染miR-106bmimics可下調(diào)包含有Akt33'-UTR的雙熒光素酶報告載體的酶活性，而當載體中miR-106b種子序列發(fā)生突變或細胞內(nèi)miR-106b的表達被抑制后，雙熒光素酶活