ATG基因調(diào)控酵母自噬的系統(tǒng)研究.pdf

1、細(xì)胞自噬（Autophagy）是高度保守的生物過程，是細(xì)胞維持完整性、內(nèi)穩(wěn)態(tài)和存活所必需的。細(xì)胞自噬主要有三種形式：巨自噬（Macroautophagy）、微自噬（Microautophagy）和分子伴侶介導(dǎo)的自噬（Chaperone-mediated autophagy, CMA），在本論文中提到的自噬單指巨自噬。
　　自噬異常與許多種疾病相關(guān)。因此，自噬分子機(jī)制的深入研究非常必要。哺乳動(dòng)物中自噬相關(guān)基因在酵母中有相應(yīng)的同源物，

2、說明自噬過程高度保守。因此，酵母中的自噬研究可為哺乳動(dòng)物中自噬研究提供新的思路。目前，在酵母中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)40個(gè)自噬相關(guān)基因（AuTophaGy-related gene,ATG）。酵母（Yeast）具有繁殖快、培養(yǎng)方便和遺傳操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，許多實(shí)驗(yàn)可以在酵母中開展來研究自噬發(fā)生各個(gè)階段。因此，本研究選擇酵母作為模式生物進(jìn)行自噬相關(guān)研究。
　　本工作以釀酒酵母為研究對(duì)象，在減氮饑餓條件下，通過觀察0-4h內(nèi)GFP-ATG8在酵母液泡內(nèi)

3、外的動(dòng)態(tài)變化，對(duì)28個(gè)ATG基因敲除菌進(jìn)行分析并分類，同時(shí)對(duì)減氮自噬關(guān)鍵ATG蛋白質(zhì)磷酸化進(jìn)行生物信息學(xué)分析。減氮處理后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表型將減氮自噬相關(guān)基因分為兩類：減氮自噬關(guān)鍵基因和減氮自噬無影響基因。
　　減氮自噬相關(guān)基因分類后，本工作根據(jù)酵母蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)數(shù)據(jù)，整理出18個(gè)ATG蛋白質(zhì)的125個(gè)磷酸化位點(diǎn)，用iGPS軟件預(yù)測(cè)自噬基因表達(dá)蛋白質(zhì)位點(diǎn)特異性激酶，共得出13個(gè)ATG蛋白的53個(gè)蛋白激酶，并構(gòu)建ATG蛋白質(zhì)及其激酶