具生物鐘表達(dá)特性的Rubisco活化酶和錳穩(wěn)定蛋白的結(jié)構(gòu)功能研究.pdf

1、本文通過cDNA陣列技術(shù)(cDNAarray)分離出水稻中具有晝夜節(jié)奏和生物鐘表達(dá)特性的基因，并著重通過多種生化手段對(duì)具有生物鐘表達(dá)特性的光合相關(guān)蛋白R(shí)ubisco活化酶(RCA)和錳簇穩(wěn)定蛋白(MSP)結(jié)構(gòu)功能進(jìn)行了研究。主要包括以下四方面的結(jié)果：1.cDNAarray分析水稻中具晝夜節(jié)奏及生物鐘變化的基因:　　我們構(gòu)建了包含有5837條具3’端Poly(A+)的非冗余的表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)的水稻cDNA陣列，用它檢測(cè)一晝夜內(nèi)不同

2、光照條件下間隔4小時(shí)的基因表達(dá)譜。 2.水稻葉片Rubisco活化酶表達(dá)的晝夜變化:　　在48h的自然光照、連續(xù)光照和連續(xù)黑暗處理下，水稻幼苗RCAmRNA的含量均表現(xiàn)出晝夜節(jié)奏特性，其中以自然光周期中變化最為明顯，連續(xù)光照可以使第一個(gè)周期的峰值提前，但連續(xù)黑暗和連續(xù)光照處理可使第二個(gè)周期的峰值明顯下降。 3.酪氨酸殘基參與維持錳穩(wěn)定蛋白功能構(gòu)象的研究:　　利用乙酰咪唑(NAI)化學(xué)修飾MSP中的酪氨酸殘基(Tyr)，結(jié)

3、果發(fā)現(xiàn)8個(gè)Tyr依其在MSP空間構(gòu)象中的位置可區(qū)分為暴露于表面，淺層包埋和深度包埋三類。約5(實(shí)際5.2)個(gè)暴露于表面的Tyr很容易被修飾上，有1-2個(gè)淺層包埋的Tyr在較高濃度的NAI條件下可以被修飾，至少還有1個(gè)處于深度包埋的Tyr只有在MSP解析疊情況下才能被修飾上?！　?.關(guān)鍵賴氨酸殘基參與維持錳穩(wěn)定蛋白功能構(gòu)象的鑒定:　　實(shí)驗(yàn)用N-丙酰基琥珀酰亞胺(NSP)對(duì)MSP中的Lys進(jìn)行專一性的修飾，以分析賴氨酸殘基(Lys)在M