小麥Rubisco活化酶基因的克隆與表達(dá)特性的研究.pdf

1、植物體內(nèi)Rubisco(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase)含量約占葉片可溶性蛋白的一半,量大但效率卻很低,Rubisco只有當(dāng)處于活化態(tài)時(shí),才能催化CO<,2>的固定.磷酸糖類如RuBP易與Rubisco結(jié)合形成鈍化態(tài)復(fù)合體,造成Rubisco構(gòu)象改變且處于失活態(tài).Rubisco活化酶(RCA)是一種核編碼的可溶性葉綠體蛋白,具有ATPase活性.它的作用表現(xiàn)在與Rubisc

2、o的鈍化態(tài)復(fù)合體相結(jié)合,依賴ATP的水解改變其構(gòu)象,促使磷酸糖類從Rubisco解離下來(lái),維持了Rubisco的初始活性和總活性.該研究利用從小麥葉片cDNA文庫(kù)獲得的rca基因片段,并研究了RCA在暗誘導(dǎo)衰老過(guò)程中的作用.研究結(jié)果簡(jiǎn)要總結(jié)如下:1參照pBK-CMV噬菌粒載體序列設(shè)計(jì)特異性引物T7和T3,通過(guò)菌落PCR從小麥葉片cDNA文庫(kù)篩選目的克隆,獲得rca的基因片段,并在GenBank上進(jìn)行了注冊(cè)(AF206372);2通過(guò)在G

3、enBank查詢其它植物的RCAα亞基基因的信息,確認(rèn)了RCAα亞基基因一個(gè)重要的保守的氨基酸序列及功能;3利用從小麥葉片cDNA克隆得到rca的中間片段作為探針模板,對(duì)暗誘導(dǎo)不同時(shí)間和對(duì)照小麥葉片進(jìn)行了初步Northern雜交分析,檢測(cè)觀察了rca基因在衰老時(shí)的表達(dá)變化規(guī)律;4測(cè)定暗誘導(dǎo)不同時(shí)間小麥葉片及對(duì)照的Pn、CE、Fv/Fm、Rubisco活性和葉綠素含量等指標(biāo),探討衰老時(shí)光合衰退的決定因素,分析了RCA在小麥葉片衰老期間的作