人類(lèi)生精相關(guān)基因DNAJB13在精子運(yùn)動(dòng)中的功能和機(jī)制研究.pdf

1、男方因素導(dǎo)致不孕不育所占比例約為50％，其中約19％與精子活力低下（又稱弱精子癥）有直接密切關(guān)系。研究表明弱精癥的病因多樣，特發(fā)性弱精癥是其中數(shù)量較多、病情較重、病因不明的一類(lèi)。遺傳因素是導(dǎo)致特發(fā)性弱精癥發(fā)生的一個(gè)主要因素。目前臨床對(duì)于這類(lèi)患者常采用人工輔助生殖技術(shù)治療，這樣就不可避免的導(dǎo)致異?；虬l(fā)生垂直傳遞，到了下一代又會(huì)面臨不育的難題。由此可見(jiàn)，要從根本上治療特發(fā)性弱精癥的問(wèn)題，就必須了解精子發(fā)生的分子機(jī)制。
　　前期的實(shí)驗(yàn)

2、研究中我們定位及克隆了人類(lèi)生精相關(guān)基因DNAJB13及其小鼠同源新基因Dnajb13。RT-PCR顯示DNAJB13在人睪丸中有高表達(dá)，在人成熟精子中亦有表達(dá)，原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DNAJB13表達(dá)于各級(jí)生精細(xì)胞。
　　目的和方法:DNAJB13在人類(lèi)睪丸組織中有高表達(dá)，但目前對(duì)DNAJB13定位、功能及作用的分子機(jī)制均尚不清楚。本研究擬通過(guò)Western Blot、免疫熒光共定位、免疫電鏡研究DNAJB13蛋白在人成熟精子中的表

3、達(dá)及定位;通過(guò)基因突變篩查研究DNAJB13基因與人類(lèi)特發(fā)性弱精癥的相關(guān)性;利用免疫共沉淀技術(shù)聯(lián)合液相質(zhì)譜分析研究DNAJB13在成熟精子運(yùn)動(dòng)過(guò)程中的相互作用蛋白。
　　結(jié)果:①Western blot結(jié)果顯示DNAJB13蛋白在成年人成熟精子中有表達(dá);免疫熒光共定位將DNAJB13蛋白進(jìn)一步定位在人成熟精子尾部;免疫電鏡實(shí)驗(yàn)則將其更精細(xì)的定位在人成熟精子鞭毛中段放射輻、外側(cè)微管、外周致密纖維以及線粒體。②國(guó)際上首次在特發(fā)性弱精癥

4、病人中發(fā)現(xiàn)DNAJB13基因第2外顯子存在2個(gè)錯(cuò)義突變(c.857T＞C、c.912T＞C)，另外檢測(cè)到第2外顯子3個(gè)已知多態(tài)位點(diǎn)(rs199547235，rs10793069，rs10793068);第3外顯子2個(gè)已知多肽位點(diǎn)(rs65326，rs145909750)，第8外顯子3個(gè)已知多態(tài)位點(diǎn)(rs2306820，rs2306819，rs72982975)。③篩查到包括HKI和LDHC在內(nèi)的一批蛋白，在人成熟精子中可能與DNAJB1