生精毓麟湯對(duì)腎精虧虛雄鼠精子功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：不育癥是男科學(xué)領(lǐng)域重要的研究課題，在對(duì)腎主生殖理論進(jìn)行探討的基礎(chǔ)上，本課題采用腺嘌呤灌胃造模方法復(fù)制大鼠腎精虧虛模型，研究生精毓麟湯對(duì)雄性大鼠精子功能和精子基因表達(dá)的影響，探討生精毓麟湯促進(jìn)雄性大鼠生殖功能的作用機(jī)制。
　　 方法：本課題采用3月齡SD雄性大鼠40只，隨機(jī)分為正常組、模型組、五子衍宗丸組、生精毓麟湯組四組，每組10只，除正常組外，其余各組大鼠均用腺嘌呤1ml/100g體重/d(藥物濃度為25mg/ml)灌胃

2、，連續(xù)30天，復(fù)制腎精虧虛模型。與此同時(shí)，正常組大鼠用1ml/100g體重/d生理鹽水灌胃，五子衍宗丸組大鼠用1ml/100g體重/d五子衍宗丸混懸液灌胃，生精毓麟湯組大鼠用1ml/100g體重/d生精毓麟湯水煎液灌胃，連續(xù)30天。然后提取精子進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：①觀察并記錄各組大鼠體重、飲食、糞便、被毛、活動(dòng)等情況。以分析天平稱重，計(jì)算各組大鼠睪丸指數(shù)。②檢測(cè)各組大鼠精子密度及活率。③分別在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下觀察各組大鼠睪丸組織的

3、顯微結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化。④取附睪制備精子懸液，進(jìn)行精子膜低滲腫脹試驗(yàn)評(píng)估精子膜完整性，精子染色質(zhì)擴(kuò)散(SCD)試驗(yàn)分析精子DNA碎片化情況，檢測(cè)精子懸液中精子抗氧化酶活性。⑤用精子懸液提取精子總RNA，制備成大鼠基因表達(dá)譜芯片，篩選生精毓麟湯對(duì)腎精虧虛大鼠精子基因表達(dá)水平的影響，以快速、準(zhǔn)確、高通量篩選其作用靶點(diǎn)，闡明其作用機(jī)理。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠睪丸指數(shù)、精子密度與活率明顯下降；光鏡下

4、曲細(xì)精管生精上皮變薄，各級(jí)生精細(xì)胞層次明顯減少，排列紊亂并出現(xiàn)空泡，連接松散。部分管腔可見(jiàn)大量生精細(xì)胞脫落，成熟精子數(shù)量減少，精子核染色深，出現(xiàn)核固縮；電鏡下曲細(xì)精管生精上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，界膜增厚，細(xì)胞空泡變性，胞漿內(nèi)線粒體變性，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、脂滴及類脂質(zhì)減少，溶酶體增多，胞質(zhì)內(nèi)有大量空泡、自噬泡和脂褐素，可見(jiàn)染色體核固縮現(xiàn)象，各級(jí)精母細(xì)胞內(nèi)均可見(jiàn)胞質(zhì)空泡，胞質(zhì)致密小體，核膜增厚，管腔中常可發(fā)現(xiàn)頂體脫落或缺陷的精子細(xì)胞。精子膜低滲腫脹率下

5、降，精子染色質(zhì)碎片化陽(yáng)性率明顯增加，精子懸液中過(guò)氧化物岐化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶濃度顯著降低，丙二醛濃度顯著升高。與模型組比較，生精毓麟湯組大鼠睪丸指數(shù)、精子密度與活率明顯上升，光鏡下大鼠睪丸組織中曲細(xì)精管各層細(xì)胞排列整齊，生精上皮發(fā)育較正常，管腔面有很多精子。電鏡下大鼠睪丸組織超微結(jié)構(gòu)基本正常，少見(jiàn)變性的細(xì)胞器。精子膜完整的精子數(shù)量明顯增加，精子染色質(zhì)碎片化陽(yáng)性率較低，精子懸液中過(guò)氧化物岐化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶濃度均有所回升，丙二醛

6、濃度下降。
　　 與正常組比較，模型組大鼠精子轉(zhuǎn)錄子表達(dá)顯著變化的有876個(gè)，其中下調(diào)812個(gè)，上調(diào)64個(gè)，差異基因主要涉及大分子的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞信息交流、防御反應(yīng)、受體活性、細(xì)胞凋亡、水解酶活性等基因；與模型組比較，生精毓麟湯組精子轉(zhuǎn)錄子表達(dá)顯著變化的有508個(gè)，其中下調(diào)72個(gè)，上調(diào)436個(gè)，差異基因主要涉及到免疫功能、氧化應(yīng)激、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)生物合成和分解、新陳代謝、遺傳信息過(guò)程、離子通道、細(xì)胞凋亡等方面；本實(shí)驗(yàn)結(jié)果

7、中顯著表達(dá)的精子基因涉及到多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如細(xì)胞粘附分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，緊密連接信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，激活受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，分裂酶原活化蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。
　　 結(jié)論：腺嘌呤可以復(fù)制腎精虧虛模型，引起雄性大鼠精子功能學(xué)指標(biāo)改變。生精毓麟湯可以顯著提高腎精虧虛型生精障礙模型大鼠的精子質(zhì)量，改善精子功能和抗氧化環(huán)境，生精毓麟湯可以保護(hù)受損的睪丸組織細(xì)胞，拮抗腺嘌呤對(duì)精子和各級(jí)生精細(xì)胞的損傷，促進(jìn)睪丸的精子