血清中抗癌多肽藥物曲普瑞林的SPE凈化方法研究.pdf

1、背景:隨著人類對自身生命現(xiàn)象探討的深入和對于體內(nèi)蛋白質(zhì)及肽類的研究越來越透徹，對于活性多肽（生物肽）的研究受到越來越多的關(guān)注。近年來，部分生物肽已經(jīng)作為藥物開發(fā)，用于多種疾病的防御和治療。曲普瑞林(Triptorelin)是一種人工合成的促性腺激素釋放激素（gonadotropin-releasinghormone，GnRH）十肽類似物。在臨床上用于子宮肌瘤、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和前列腺癌的治療。
　　 隨著多肽類藥物的開發(fā)和使用

2、，對分離和檢測多肽類藥物方法的需求越來越迫切。如唾液、血液、尿液中藥物濃度和存在形式的檢測對于研究該藥物的代謝時間、途徑及產(chǎn)物有著重要的意義，可提供該藥物的使用劑量、給藥時間、及毒副作用等數(shù)據(jù)。目前體內(nèi)多肽類藥物的檢測方法有直接檢測和富集后再檢測兩種方法。對于藥物濃度較高受基質(zhì)干擾較少的藥物，直接檢測的方法較為快速。但，對大多數(shù)藥物而言，體內(nèi)存在的濃度較低，且受基質(zhì)干擾較大，需要經(jīng)過適當(dāng)?shù)那疤幚?，排除基質(zhì)的干擾并對待測藥物加以濃縮，才能

3、檢測到。
　　 多肽類藥物的濃縮方法較多，如蛋白質(zhì)沉淀法，液液萃取法，固相萃取法等。蛋白質(zhì)沉淀法，可以除去基質(zhì)中大量干擾多肽類藥物檢測的蛋白，對目標(biāo)多肽有一定的富集作用，但對基質(zhì)中其它干擾性多肽的除去并不理想。液液萃取法是利用目標(biāo)多肽和干擾物質(zhì)在互不相容的兩相中溶解度的不同而加以分離，這種方法在一定程度上可以實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)的排除和目標(biāo)化合物的富集。但液液萃取存在一些問題，如選擇性不高，且有機(jī)溶劑使用量大，對部分目標(biāo)化合物難以找到完全將

4、其與基質(zhì)分離的互不相溶的兩相。固相萃取由于其高效、可靠及耗用溶劑量少等優(yōu)點(diǎn)，在檢測等許多領(lǐng)域得到了快速發(fā)展。準(zhǔn)確測定血液中藥物濃度，能夠有效地監(jiān)測藥物在人體或動物體內(nèi)的使用及代謝情況，更好地指導(dǎo)臨床用藥;固相萃取技術(shù)作為藥物樣品的色譜分析前處理技術(shù)，被廣泛應(yīng)用在藥代動力學(xué)研究中。
　　 目的:本實(shí)驗(yàn)選用蛋白沉淀和固相萃取聯(lián)用對血清進(jìn)行前處理，采用乙腈沉淀蛋白后，上清液再利用反向模式、親水模式、離子交換模式的固相萃取做富集，對經(jīng)過

5、一系列前處理的血清多肽進(jìn)行富集后，聯(lián)合UPLC/Q-TOF分析方法，建立一種檢測血清中的多肽藥物的方法。通過考察多組患者血清中所檢測到的標(biāo)記的多肽藥物，來驗(yàn)證方法的可用性，同時為對復(fù)雜樣品（如血清、尿液等）的處理及檢測提供指導(dǎo)方法和理論依據(jù)，并為進(jìn)一步研究其它腫瘤多肽藥物打下基礎(chǔ)。
　　 方法:收集60例癌癥患者血清分裝、乙腈沉淀，再利用反向模式、親水模式、離子交換模式的固相萃取做富集，最后應(yīng)用納升級高效液相色譜，質(zhì)譜(nano

6、UPLC-MS)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行色譜分離、質(zhì)譜檢測、markerlynx軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、數(shù)據(jù)搜庫、鑒定檢測結(jié)果。
　　 結(jié)果:三種模式下均成功檢測到了血漿中的曲普瑞林，成功建立了三種模式下曲普瑞林的血漿檢測方法。其中檢測結(jié)果顯示親水模式好于反向模式，反向模式好于離子交換模式。
　　 結(jié)論:通過對患者血清中的曲普瑞林的檢測、鑒定，成功的驗(yàn)證出本實(shí)驗(yàn)所建立的多肽曲普瑞林檢測方法的可用性及應(yīng)用價值:1.建立了一種SPE-HPLC