文蛤抗癌活性多肽的研究.pdf

1、癌癥是當(dāng)前危害人類健康和生命最為嚴(yán)重的的主要常見病、多發(fā)病之一。在中國，癌癥已經(jīng)取代心血管疾病成為死亡率最高的疾病，是名副其實(shí)的“頭號(hào)殺手”。從天然生物中篩選出能與癌癥發(fā)生、發(fā)展、形成等過程中各調(diào)節(jié)靶點(diǎn)特異結(jié)合的活性成分，已成為尋找抗癌藥物的新熱點(diǎn)，也是我國“十一五”期間的生物醫(yī)藥研究的重點(diǎn)方向之一。相比于傳統(tǒng)抗癌藥物毒副作用大、特異性差、易產(chǎn)生抗性等缺點(diǎn)，生物來源的抗癌活性多肽具有多功能性、功能反應(yīng)靈敏性、穩(wěn)定性、高營養(yǎng)價(jià)值且低毒副作

2、用、無抗原性、結(jié)構(gòu)簡單易于合成等優(yōu)點(diǎn)。文蛤(Meretrix Meretrix Linnaeus)不僅肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富，而且具有很高的藥用價(jià)值。據(jù)報(bào)道文蛤具有清熱利濕、化痰、散結(jié)的功效，對肝癌、肺癌、胃癌、甲狀腺腫等有明顯的抑制作用，而且還能夠發(fā)揮降糖，降血脂，抗突變、抗衰老等多種生理功能，是一種極具開發(fā)潛力的抗癌資源。 在優(yōu)化純化方案的基礎(chǔ)上，本論文采用破碎、有機(jī)沉淀、分子篩和HPLC等方法從文蛤中提取了具有抗癌活性的多肽，

3、PAGE電泳顯示為單一條帶，將它命名為MP1。采用MTT法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法分別研究了文蛤多肽MP1對肝癌細(xì)胞SMMC-7721、胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823等多種癌細(xì)胞的抑制作用。 結(jié)果顯示，MP1在較低的濃度下就能對上述幾種細(xì)胞產(chǎn)生明顯的抗癌活性，其IC50均低于5μg/mL，具有較好的廣譜抗癌活性；結(jié)果還表明，經(jīng)5.0μg/mL文蛤多肽MP1處理的體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞(SMMC-7721)生長緩慢，倍增時(shí)間延長，細(xì)胞

4、生長抑制率達(dá)89.4％。采用光學(xué)顯微鏡、H.E.染色法、掃描電鏡法、透射電鏡法及流式細(xì)胞技術(shù)等方法，初步研究了文蛤多肽對體外培養(yǎng)的肝癌SMMC-7721細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、顯微結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)及其細(xì)胞周期的影響，以期初步探討文蛤多肽抗癌的分子機(jī)理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：處理后的癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，出現(xiàn)了細(xì)胞群體數(shù)量減少、體積變小、畸形形變、微絨毛減少、貼壁性能減弱、細(xì)胞核固縮、染色質(zhì)新月形并邊緣化、產(chǎn)生凋亡小體和出泡現(xiàn)象等一系列凋亡特征的改變。流式細(xì)

5、胞技術(shù)結(jié)果說明，經(jīng)MP1處理后，SMMC-772l處于G0/G1期和M期的細(xì)胞明顯減少，而S期細(xì)胞增多，并在G0/G1期前出現(xiàn)明顯的凋亡峰，凋亡率為9.29％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，文蛤抗癌多肽(MP1)能有效地抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞的增殖活動(dòng)，可通過改變肝癌細(xì)胞的形態(tài)及細(xì)胞周期而明顯抑制細(xì)胞的增殖，并引起細(xì)胞的凋亡。 為進(jìn)一步研究文蛤抗癌多肽抑制癌細(xì)胞的分子機(jī)制，本論文還利用蛋白組學(xué)雙向電泳技術(shù)初步探討了在經(jīng)文蛤抗癌多肽作用前后肝癌細(xì)胞

6、SMMC-772l蛋白表達(dá)的變化，以期為后續(xù)的研究提供理論基礎(chǔ)。通過圖譜分析找到136個(gè)差異蛋白，其中96個(gè)表達(dá)下調(diào)，40個(gè)表達(dá)上調(diào)。對其中部分差異較明顯的點(diǎn)進(jìn)行了鑒定，最終鑒定出11種差異蛋白。其中6個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，5個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)。這些差異蛋白中有分子伴侶蛋白、細(xì)胞骨架蛋白、鋅指蛋白、代謝相關(guān)蛋白、調(diào)控蛋白等。表明經(jīng)文蛤多肽作用后癌細(xì)胞從結(jié)構(gòu)組成及其穩(wěn)定性到生理代謝都發(fā)生了變化。論文最后對部分差異點(diǎn)的功能進(jìn)行了初步探討，并嘗試提出了