蠶蛹活性多肽的制備及降血壓、降血糖活性研究.pdf

1、蠶蛹(silkwormpupae)，是家蠶上蔟結(jié)繭后4天左右所形成的產(chǎn)物，是繅絲工業(yè)的副產(chǎn)品。我國是養(yǎng)蠶大國，蠶蛹產(chǎn)量很大，但由于缺乏深加工技術(shù)，基本上都被用作飼料，資源利用率低。但是，干蠶蛹的營養(yǎng)卻很豐富，其中粗蛋白質(zhì)含量高達(dá)50％，油脂含量高達(dá)25％～30％，還含有多種維生素，微量元素以及甲殼素、抗菌肽、多糖等，是“作為普通食品管理的新資源名單”中唯一上榜的昆蟲類。因此，加大對蠶蛹的開發(fā)力度具有重要的意義和廣闊的前景。
　　

2、 “三高癥”是指高血壓、高血糖（即糖尿?。┖透咧Y。它們是現(xiàn)代社會派生出來的“富貴病”，或單獨(dú)存在，或相互關(guān)聯(lián)。譬如:糖尿病人很容易同時患上高血壓或高血脂癥，而高血脂又是動脈硬化形成和發(fā)展的主要因素，動脈硬化患者血管彈性差加劇血壓升高。所以，當(dāng)出現(xiàn)這三種病癥中的任何一種，后期都易形成“三高癥”。高血壓和高血糖的危險(xiǎn)性不可小覷，目前臨床常用的降血壓藥物有很多種，它們治療高血壓的效果十分顯著，但是長期服用易引起皮疹、泌尿系統(tǒng)病變等副作用;

3、而糖尿病治療的化學(xué)類藥物也存在毒副作用大這一難題?；谑袌鰧Π踩?、方便、有效的降血壓、降血糖藥物的迫切需要，人們便把目光投向了天然降血壓、降血糖物質(zhì)。
　　 本文的研究工作主要側(cè)重于蠶蛹蛋白活性多肽的制備和它在動物體內(nèi)的活性探究。首先選擇適合的蛋白酶對經(jīng)過脫脂處理的蠶蛹蛋白進(jìn)行雙酶解，先進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，再通過設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，隨后采用大孔樹脂、葡聚糖凝膠、半制備液相色譜技術(shù)對蠶蛹活性多肽進(jìn)行分離純化，最后在動物體內(nèi)進(jìn)行活性測定

4、，有望進(jìn)一步開發(fā)成降血壓、降血糖藥物或者功能性保健品。這樣一來，既能避免蠶蛹作為繅絲副產(chǎn)品的資源浪費(fèi)，也能促進(jìn)對蠶蛹蛋白資源的進(jìn)一步利用。本文由國家桑蠶產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系“蠶桑大宗資源深度利用關(guān)鍵技術(shù)與產(chǎn)業(yè)化規(guī)范”項(xiàng)目提供資金支持，是該項(xiàng)目的部分研究內(nèi)容，主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)蛋白酶水解選擇及優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
　　 本實(shí)驗(yàn)選擇中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶5種蛋白酶對脫脂處理后的蠶蛹蛋白進(jìn)行雙酶解效

5、果實(shí)驗(yàn)，以水解度(DH)和血管緊張素酶(ACE)抑制率作為考察指標(biāo)，最終得到的結(jié)果是，以堿性蛋白酶和復(fù)合性蛋白酶雙酶解制備出的蠶蛹活性多肽ACE抑制率最高，達(dá)到38.09％。
　　 在響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行了酶解時間、pH、底物濃度、加酶量、反應(yīng)溫度這五個因素的單因素實(shí)驗(yàn)，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，最終得到最佳的酶解條件為:酶解時間3.5h，底物濃度10.12％，溫度50.22℃，pH8.5，加酶量7.03％。
　　

6、 (2)大孔樹脂、葡聚糖凝膠及半制備RP-HPLC純化分離純化蠶蛹活性多肽的實(shí)驗(yàn)
　　 本實(shí)驗(yàn)選擇大孔樹脂DA201-C首先進(jìn)行脫色脫鹽處理，上樣流速為0.5ml/min，洗脫劑為75％的乙醇，洗脫流速為2.0ml/min。
　　 將大孔樹脂分離得到的解析液，再經(jīng)過SephadexG-25和SephadexLH-20純化，出現(xiàn)5個峰，其ACE抑制率分別為:P1-24.82％，P2-22.37％，P3-32.64％，P4

7、-34.82％，P5-44.37％，因此選擇P5進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　 將峰P5的組分進(jìn)行半制備HPLC分析，取色譜圖中分離較好的幾個組分，測定其ACE抑制率，并用SDS-PAGE電泳法測其分子量范圍。
　　 (3)蠶蛹活性多肽的體內(nèi)降血壓活性探究
　　 本實(shí)驗(yàn)選擇自發(fā)性高血壓模型大鼠為實(shí)驗(yàn)動物，采取卡托普利為對照藥物，將葡聚糖凝膠純化后的多肽液冷凍干燥后按一定劑量進(jìn)行一次性和長期給藥，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)所提取的