膽汁內(nèi)外引流術(shù)對(duì)梗阻性黃疸大鼠腸屏障功能的影響.pdf

1、背景：梗阻性黃疸(Obstructive Jaundice,OJ,以下簡(jiǎn)稱梗黃)是臨床常見(jiàn)疾病,后期患者容易發(fā)生感染、肝腎功能不全甚至并發(fā)多器官功能衰竭,死亡率很高。且梗黃患者術(shù)后并發(fā)癥多,大量研究表明,這與梗黃發(fā)病過(guò)程中腸黏膜屏障損傷進(jìn)而引起細(xì)菌和內(nèi)毒素經(jīng)門(mén)靜脈入血,導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子的“瀑布樣”效應(yīng),形成所謂“腸源性膿毒癥”有關(guān)。其中膽鹽、氧化應(yīng)激、炎性介質(zhì)、腸道微生態(tài)改變與腸屏障的改變有密切關(guān)系,研究梗黃時(shí)腸黏膜屏障損傷有十分重要的

2、意義。目前解除膽道梗阻有膽汁內(nèi)引流術(shù)和膽汁外引流術(shù)兩種方法,多數(shù)學(xué)者的研究表明,膽汁內(nèi)引流術(shù)效果優(yōu)于外引流。膽汁內(nèi)引流術(shù)與外引流術(shù)的根本區(qū)別在于膽汁是否重新進(jìn)入腸道,膽汁酸作為信號(hào)分子可以通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、調(diào)節(jié)體內(nèi)能量代謝以及抑制腸道細(xì)菌過(guò)度增殖等作用。因此,我們提出假設(shè):膽汁酸作為信號(hào)分子與膽汁酸受體(Farnesoid X Receptor,FXR,也即法尼酯衍生物X受體)結(jié)合后激活信號(hào)傳導(dǎo)通路,調(diào)節(jié)FXR在小腸上皮細(xì)胞

3、的表達(dá),促進(jìn)腸道屏障的修復(fù)并減少細(xì)菌移位。
　　 目的：利用既往改進(jìn)的梗黃及膽汁內(nèi)外引流動(dòng)物模型,觀察大鼠腸黏膜組織形態(tài)、腸道機(jī)械屏障(閉鎖蛋白Occludin)、總膽汁酸(Toral Bile Acid,TBA)及其受體FXR和細(xì)菌移位的變化,進(jìn)而探討膽汁內(nèi)引流術(shù)優(yōu)于外引流術(shù)的機(jī)制,為臨床治療方式的選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：采用成年雄性Sprague—Dawley大鼠59只,隨機(jī)分為4組,即假手術(shù)組(SH,n=1

4、4)、梗阻性黃疸組(OJ,n=14)、膽汁外引流組(ED,n=15)和膽汁內(nèi)引流組(ID,n=16)。建立動(dòng)物模型:第一次手術(shù)建立OJ模型(分離膽管并結(jié)扎、切斷)和SH模型(只分離膽管不結(jié)扎),OJ術(shù)后7天行第二次手術(shù),建立ID模型(膽管與十二指腸間建立引流)和ED模型(膽管插管經(jīng)皮引流至體外)。模型建立成功后取門(mén)靜脈血和下腔靜脈血做細(xì)菌培養(yǎng),用ELASA方法檢測(cè)血清TBA并計(jì)數(shù)白細(xì)胞數(shù)目(WBC)。取末端回腸常規(guī)病理染色分析腸絨毛組織

5、形態(tài)學(xué)變化,免疫組化方法檢測(cè)Occludin和FXR在腸道的表達(dá)。
　　 結(jié)果：成功建立四組大鼠模型。膽管梗阻形成后OJ組WBC(11.4±2.7×109/L)、TBA(118.9±39.0μmol/L)、Chiu腸黏膜損傷評(píng)分(2.1±1.1分)和血培養(yǎng)細(xì)菌陽(yáng)性率(57.1％)較假手術(shù)組WBC(5.5±1.0×109/L)、TBA(38.0±15.0μmol/L)、Chiu評(píng)分(0.4±0.8分)和細(xì)菌陽(yáng)性率(0％)均明顯升高

6、(P<0.05)。而回腸黏膜絨毛高度(297.9±49.0μm)、絨毛高/寬度比值(3.8±1.2)、FXR(0.33±0.06)和Occludin表達(dá)(O.15±0.02)較假手術(shù)組絨毛高度(389.9±60.5μm)、高/寬比(5.1±1.2)、FXR(0.39±0.06)和Occludin表達(dá)(0.22±0.05)均明顯下降(p<0.05)。行膽汁內(nèi)引流術(shù)后,腸絨毛高度、高/寬比值、FXR和Ocdudin表達(dá)均與對(duì)照組(SH組)無(wú)

7、顯著差異(P>0.05),WBC、TBA和Chiu評(píng)分與SH組有差異但是均趨向于SH組水平,血培養(yǎng)細(xì)菌陽(yáng)性率增加至62.5％。ED組WBC、TBA、絨毛高度、高/寬比、Chiu評(píng)分、FXR和Occludin表達(dá)均與SH組差異顯著(P<0.05),血培養(yǎng)細(xì)菌陽(yáng)性率增加至(80％)。四組門(mén)靜脈與腔靜脈血血培養(yǎng)陽(yáng)性率及細(xì)菌種類均相同。
　　 結(jié)論：梗黃形成后,膽汁大量淤積造成全身炎癥反應(yīng),白細(xì)胞數(shù)升高,同時(shí)腸道缺乏膽汁使FXR表達(dá)減弱