桑葚體外模擬消化產(chǎn)物對(duì)肝臟細(xì)胞損傷的保護(hù)效應(yīng)及其機(jī)理研究.pdf

1、桑葚是一種“藥食同源”的漿果，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，具有諸多保健功能。為科學(xué)評(píng)價(jià)桑葚的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和生物活性，本文結(jié)合體外模擬胃腸道消化模型和氧化損傷細(xì)胞模型研究了桑葚中的生物活性成分及其抗氧化活性，并圍繞桑葚體外模擬胃腸道消化產(chǎn)物對(duì)抗丙烯酰胺誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞損傷的保護(hù)效應(yīng)及其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下：
　　(1)體外模擬胃腸道對(duì)桑葚活性成分含量及抗氧化活性的影響
　　100g桑葚鮮果經(jīng)體外模擬胃腸道消化后，30

2、0mL體外消化產(chǎn)物（生物可利用部分）中酚類(lèi)、黃酮、花色苷、原花青素的含量分別為463.88±5.81mg沒(méi)食子酸當(dāng)量、363.51±6.73mg蘆丁當(dāng)量、71.58±2.29mg矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷當(dāng)量、217.43±7.01mg兒茶素當(dāng)量，具有較好的體外及細(xì)胞水平抗氧化能力。與桑葚胃消化產(chǎn)物（Mulberry gastric digest，MBG）相比，桑葚腸消化產(chǎn)物(Mulberrygastrointestinal digest，

3、MBD)的酚類(lèi)、花色苷、原花青素含量分別減少了3.24％、76.02％、61.85％，黃酮含量增加了53.91％，體外和細(xì)胞水平抗氧化能力均明顯高于MBG;與桑葚醇提物(Mulberry ethanol extracts，MBE)，即桑葚未消化組相比，MBD中的酚類(lèi)、花色苷、原花青素含量顯著低于MBE，但黃酮含量高于MBE2.63％，體外抗氧化能力相當(dāng)或低于MBE，但細(xì)胞水平抗氧化能力則明顯高于MBE。
　　(2)桑葚體外消化產(chǎn)物

4、(MBD)對(duì)丙烯酰胺（Acrylamide，AA）誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞（HepG2）損傷的保護(hù)作用
　　采用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖活力，結(jié)果表明5mM丙烯酰胺（AA處理組）作用HepG224h后，細(xì)胞存活率僅為空白對(duì)照組的50.68％;與AA處理組相比，1mg/mL MBD、MBE處理組的細(xì)胞存活率分別提高了6.78％和21.88％(P＜0.01);通過(guò)動(dòng)態(tài)熒光可視技術(shù)、分子探針等現(xiàn)代分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(Reactive

5、oxygen species，ROS)含量、谷胱甘肽水平、線粒體膜脂質(zhì)氧化、線粒體膜電位、細(xì)胞核損傷，研究發(fā)現(xiàn)1 mg/mL MBE、MBD可有效清除AA誘導(dǎo)的ROS，恢復(fù)谷胱甘肽水平，緩解了由AA誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，減輕線粒體膜脂質(zhì)氧化損傷，恢復(fù)線粒體膜電位，抑制細(xì)胞核損傷，從而維持細(xì)胞功能正常，起到保護(hù)作用。
　　(3)桑葚體外消化產(chǎn)物和丙烯酰胺對(duì)HepG2細(xì)胞抗氧化酶活性及Nrf2-ARE通路相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　H

6、epG2細(xì)胞經(jīng)AA作用后，超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)和過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT)的活性顯著降低，分別為空白對(duì)照組的49.44％和72.57％。1mg/mL MBD可有效提高CAT酶活性約23.66％。運(yùn)用Real-Time qPCR技術(shù)檢測(cè)Nrf2-ARE通路上Nrf2、HO-1、γ-GCS、GSTP1基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)變化，結(jié)果表明丙烯酰胺可誘導(dǎo)Nrf2、HO-1、γ-GCS和G

7、STP1基因上調(diào)表達(dá)，分別為空白對(duì)照組的2.96倍、4.46倍、4.17倍和1.30倍，以提高細(xì)胞抗氧化能力，抵抗氧化損傷;1mg/mL MBD、MBE處理組可有效清除AA誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS，緩解細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，因此Nrf2及下游系列基因表達(dá)量較AA處理組有所降低。
　　綜上所述，桑葚經(jīng)體外模擬胃腸道消化后，活性成分發(fā)生較大變化，仍具有良好的體外及細(xì)胞水平抗氧化能力，并可有效抑制AA誘導(dǎo)的肝臟細(xì)胞HepG2損傷，其作用機(jī)理可能與