黑莓體外模擬消化產(chǎn)物對(duì)肝細(xì)胞損傷防護(hù)作用的研究.pdf

1、水果中的活性物質(zhì)在人體胃腸消化過程中會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化和降解，為科學(xué)評(píng)價(jià)水果的營養(yǎng)價(jià)值、抗氧化活性和對(duì)人體的功能性，本文結(jié)合體外模擬胃腸道消化模型和細(xì)胞模型，研究了黑莓在模擬胃腸道消化不同階段的抗氧化成分（多酚、黃酮、花色苷、原花青素）的含量、抗氧化還原活性及對(duì)肝細(xì)胞氧化損傷的防護(hù)作用，并深入探究其防護(hù)作用機(jī)理。
　　從天然植物中挖掘安全有效的功能因子，探索其防護(hù)細(xì)胞氧化損傷的作用，已成為近年來功能性食品和天然藥物研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。黑莓

2、具有降壓、降血脂和抗心律失常等功能功效，但是有關(guān)其消化產(chǎn)物對(duì)丙烯酰胺（AA）所致肝細(xì)胞損傷防護(hù)作用至今未見報(bào)道。本論文以丙烯酰胺為肝細(xì)胞損傷的誘導(dǎo)劑，結(jié)合模擬消化模型和HepG2細(xì)胞模型，從抗氧化性、細(xì)胞活力、酶活性及基因表達(dá)等幾方面探究黑莓體外消化產(chǎn)物對(duì)肝細(xì)胞的損傷防護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)理。主要結(jié)果如下:
　　(1)黑莓體外消化產(chǎn)物的活性成分含量及抗氧化還原活性
　　采用模擬胃消化和模擬腸消化兩個(gè)階段的體外消化模型，發(fā)現(xiàn)體外胃

3、腸消化會(huì)對(duì)黑莓多酚、黃酮、花色苷及原花青素的含量產(chǎn)生不同程度的影響。ABTS抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)模擬腸消化后，黑莓抗氧化活性與未消化組相比提高了47.06％，其中未消化、胃消化和腸消化的IC50分別為6.12 mg/mL、4.5 mg/mL、3.24 mg/mL; FRAP測(cè)定黑莓體外消化前后氧化還原活性結(jié)果顯示，胃消化后還原能力提高，其中未消化、胃消化及腸消化組分的Trolox等價(jià)抗氧化能力分別為2.46、4.32、2.45μg/m

4、g黑莓（鮮重）。
　　(2)黑莓體外消化產(chǎn)物對(duì)HepG2細(xì)胞的損傷防護(hù)作用
　　使用HepG2細(xì)胞模型檢測(cè)細(xì)胞活力，結(jié)果表明0.25-2 mg/mL的黑莓體外消化組分對(duì)細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生毒性，而丙烯酰胺會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞HepG2損傷(細(xì)胞存活率63.37％)，而黑莓腸消化組分(0.5 mg/mL)能顯著抑制丙烯酰胺引發(fā)的細(xì)胞毒性(細(xì)胞存活率85.19％)。進(jìn)一步運(yùn)用動(dòng)態(tài)熒光可視技術(shù)、分子探針等現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，研究細(xì)胞防護(hù)作用機(jī)理，

5、發(fā)現(xiàn)黑莓體外消化產(chǎn)物能夠有效降低細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的含量，防護(hù)細(xì)胞線粒體氧化損傷和細(xì)胞核損傷，恢復(fù)線粒體膜電位及細(xì)胞谷胱甘肽的含量，從而防護(hù)了細(xì)胞的氧化損傷。
　　(3)黑莓體外消化產(chǎn)物防護(hù)細(xì)胞氧化損傷作用機(jī)理的探究
　　通過檢測(cè)細(xì)胞抗氧化酶類SOD和CAT的活性，發(fā)現(xiàn)黑莓腸消化樣品(0.5 mg/mL)能有效恢復(fù)氧化損傷導(dǎo)致的SOD、CAT酶活性降低，可見黑莓體外消化產(chǎn)物可提高細(xì)胞內(nèi)SOD和CAT等抗氧化酶類的活性，使機(jī)體

6、抗氧化能力增強(qiáng)從而防護(hù)細(xì)胞氧化損傷。通過檢測(cè)抗氧化及二相解毒酶類基因Nrf2、HO-1、NQO1、Y-GCS、GSTP1、SOD1和CAT在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)在丙烯酰胺的氧化損傷下，細(xì)胞由于自身的防御機(jī)制，使抗氧化基因的表達(dá)量有所提高，其中CAT的表達(dá)量受到抑制，Nrf2和GSTP1基因無顯著變化;而在黑莓腸消化產(chǎn)物的作用下，會(huì)使抗氧化基因的表達(dá)量進(jìn)一步升高，增加細(xì)胞的抗氧化能力。本研究證明黑莓體外消化產(chǎn)物對(duì)HepG2細(xì)胞二相解