雙黃連對犬肝細胞對乙酰氨基酚損傷的保護作用.pdf

1、雙黃連由金銀花、黃芩、連翹3味中藥組成,具有清熱解毒、辛涼解表等功效。藥物進入動物機體后,要在酶的參與下進行分解、代謝。參與藥物代謝的酶主要是細胞色素P450酶系,它主要存在于肝臟的微粒體中。
　　 目的:建立分離及培養(yǎng)犬原代肝細胞的方法,并通過體外實驗探討雙黃連及各單味藥物相互作用的分子機理以及其對肝損傷的保護作用,為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:通過膠原酶兩步灌流法獲取犬肝細胞,用含多種輔助因子的Willi

2、ams’E培養(yǎng)基進行培養(yǎng),每天觀察肝細胞的生長情況,并進行圖像采集。同時用對乙酰氨基酚(AP)來制備肝細胞損傷模型,收集不同時段細胞培養(yǎng)上清液,MTT法測定肝細胞的存活率,分光光度法測定細胞培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙二醛(MDA)及乳酸脫氫酶(LDH)的含量,用不同濃度的雙黃連及各單味藥處理損傷的犬肝細胞24-48h,Westen-blot法檢測犬肝細胞中CYP450的表達。
　　 結(jié)果:通過膠原酶兩

3、步灌流法,每只犬可獲得肝細胞7.2×109個,用臺盼藍排除法檢測到6.81×109個活細胞,成活率高達94.6％。培養(yǎng)的肝細胞形態(tài)完整、生長良好,可用于藥物代謝的研究。16mM AP是致體外培養(yǎng)肝細胞損傷的最適濃度。不同濃度的雙黃連處理損傷的犬肝細胞后,作用24h時CYP450的表達呈升高趨勢,但在藥物濃度達到25mM的時候CYP450的表達呈降低趨勢；48h時CYP450的表達隨雙黃連濃度的增加而呈降低趨勢,1mM、2mM與5mM組對