咪唑克生對膿毒癥小鼠的器官保護及抗氧化應激分子機制研究.pdf

1、目的：探討咪唑克生(IDA)對脂多糖誘導膿毒癥小鼠的器官保護作用及抗氧化應激分子機制。
　　方法：
　　(1)將60只成年C57BL/6小鼠隨機分為對照組（12只，腹腔注射磷酸鹽緩沖液）、LPS組（12只，腹腔注射LPS10mg/kg）、低劑量組（12只，腹腔注射LPS10mg/kg和IDA1mg/kg）、中劑量組（12只，腹腔注射LPS10mg/kg和IDA2mg/kg）和高劑量組（12只，腹腔注射LPS10mg/kg和I

2、DA4mg/kg），于制模后24h處死所有小鼠，采集血和肝、肺、腎臟器組織標本。全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的水平；化學比色法檢測肝組織勻漿中丙二醛（MDA）含量以及總超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、總谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）的活性；蘇木精-伊紅染色觀察肝、肺、腎組織病理學改變；Wes tern Blo t法檢測肝組織勻漿中HO-1、NQO-1、Nrf2蛋白表達；免

3、疫組化法檢測肝、腎組織Nrf2的表達。
　　(2)體外培養(yǎng)小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞，隨機分為四組：對照組、LPS組、治療組及IDA組，對照組僅用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，LPS組給予10μg/ml LPS刺激，LPS+IDA組同時給予10μg/ml LPS+100μM IDA作用，IDA組給予100μM IDA處理。以2，7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針，運用流式細胞儀及熒光顯微鏡檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)水

4、平；Western Blot法檢測細胞中 HO-1、NQO-1、Nrf2蛋白表達，細胞免疫熒光檢測細胞內(nèi)HO-1的表達。
　　結(jié)果：
　　(1) LPS刺激24h，LPS組小鼠血清中ALT、AST水平均顯著高于對照組[ALT(U/L):88.10±12.05比35.93±3.02；AST(U/L):311.97±75.04比136.77±10.80；均P＜0.01]。IDA能有效降低LPS所致的小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的異常升高[AL

5、T(U/L)：低劑量組68.40±5.17比88.10±12.05（P=0.06），中劑量組51.10±5.66比88.10±12.05(P＜0.01)，高劑量組44.27±9.10比88.10±12.05(P＜0.01);AST(U/L)：低劑量組257.73±51.97比311.97±75.04(P=0.36)，中劑量組194.37±20.84比311.97±75.04(P=0.06)，高劑量組161.13±27.91比311.97

6、±75.04(P＜0.05)]。肝組織勻漿中，LPS組的 MDA水平顯著高于對照組[(6.37±1.45)nmo l/mg比(1.13±0.25)nmol/mg, P＜0.01]，抗氧化蛋白酶（SOD、CAT及GPx）的活性顯著降低[SOD(U/mg):0.97±0.35比3.83±0.71; CAT(U/mg):30.67±7.02比70.33±8.50; GPx(U/mg):8.33±2.52比30.33±5.51,；均P＜0.01

7、]。然而，咪唑克生治療則可呈劑量依賴性地減少丙二醛（MDA）水平[低劑量組(4.83±0.80) nmol/mg比(6.37±1.45) nmo l/mg(P=0.18)，中劑量組(3.20±0.62) nmol/mg比(6.37±1.45) nmo l/mg(P＜0.05)，高劑量組(2.30±0.46) nmol/mg比(6.37±1.45) nmol/mg(P＜0.01)]及改善抗氧化蛋白酶（SOD、CAT及GPx）活性的抑制[S

8、OD(U/mg):低劑量組1.47±0.31比0.97±0.35(P=0.14)，中劑量組2.36±0.47比0.97±0.35(P＜0.05)，高劑量組3.27±0.70比0.97±0.35(P＜0.01); CAT(U/mg):低劑量組50.33±13.50比30.67±7.02(P=0.09)，中劑量組67.67±13.50比30.67±7.02(P＜0.05)，高劑量組80.67±13.01比30.67±7.02(P＜0.01)

9、;GPx(U/mg):低劑量組15.67±4.04比8.33±2.52(P=0.06)，中劑量組21.33±4.51比8.33±2.52(P＜0.05)，高劑量組35.33±9.07比8.33±2.52(P＜0.01)]。IDA還可明顯改善小鼠肝、肺、腎的病理改變，并且可增加肝組織中HO-1、NQO-1及Nrf2及腎組織中Nrf2的表達。
　　(2)體外實驗中，與對照組相比，RAW264.7細胞受到LPS刺激后，細胞內(nèi)ROS明顯增