谷氨酰胺對膿毒癥小鼠氧化應激作用效果的研究.pdf

1、目的:探討谷氨酰胺可否對膿毒癥小鼠的氧化應激損傷起到減輕或者延緩，從而在危重癥疾病氧化應激狀態(tài)下發(fā)揮保護作用。
　　方法:
　　1、動物分組與造模方法:96只昆明小鼠按完全隨機方法分成4組，每組24只，分別設為空白組、模型組、谷氨酰胺低劑量組和谷氨酰胺高劑量組?？瞻捉M腹腔注射生理鹽水，模型組和谷氨酰胺組腹腔注射內毒素制造膿毒癥動物模型，注射計量為5mg/kg;造型成功后模型組尾靜脈注射生理鹽水，谷氨酰胺低劑量組1h后尾靜脈注

2、射0.75g/kg谷氨酰胺，高劑量組1h后注射1.5g/kg谷氨酰胺。分別在1h、6h、12h眼眶取血后處死小鼠，解剖分離動物肝，用液氮迅速冷凍，之后放入-80℃低溫冰箱保存。
　　2、谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化酶歧化酶、丙二醛測定方法
　　取4組小鼠血清、肝組織勻漿進行氧化應激指標超氧化酶歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase，GSH-Px

3、)、丙二醛(malonaldehyde，MDA)的測量。對樣品測試前先將其從-80℃低溫冰箱中取出，放入4℃冰箱中進行解凍。用冰冷的生理鹽水對動物組織塊進行漂洗，去除血液，用濾紙擦干，精確稱重0.1g，置于勻漿管中，以重量(g)∶體積(ml)=1∶9的比例加0.9ml生理鹽水于勻漿管中，用眼科小剪在冰水浴條件下快速剪碎組織塊。在冰水浴條件下手動勻漿組織塊，30秒/次，間歇30秒，如此重復研磨6～8次，制成10％組織勻漿。用高速離心機25

4、00～3000r/min將制備好的10％勻漿液離心15min，取上清液。取適量10％的勻漿液按體積比1∶9稀釋成1％的組織勻漿待測。為保證實驗結果準確性，當天對勻漿液進行測定。
　　3、采用Excle2007進行數(shù)據(jù)錄入，SPSS13.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計描述與分析。計量資料的統(tǒng)計描述結果以（(x)±s）表示，對4組數(shù)據(jù)進行正態(tài)性和方差齊性檢驗，如果各組數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性和方差齊性，則選擇參數(shù)檢驗方法。兩個獨立樣本的比較采用完全獨立兩樣本比

5、較的t檢驗，三個獨立樣本的比較采用單因素方差分析。如資料不服從正態(tài)性和方差齊性，采用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H非參數(shù)檢驗，進一步的兩兩比較采用Nemenyi法檢驗。檢驗水準α=0.05，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、小鼠血清和肝臟SOD指標水平比較:
　　1.1 SOD指標1小時時刻比較:
　　1.1.1血清SOD指標比較:四組小鼠SOD水平相比，差異有統(tǒng)計學意義

6、(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清SOD水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;模型組血清SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Gln低劑量組血清SOD水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　1.1.2肝臟SOD指標比較:四組小鼠肝臟SOD水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組肝臟SOD水平與空白組比較，差異有統(tǒng)

7、計學意義(P＜0.05）;而模型組肝臟SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Gln低劑量組肝臟SOD水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　1.2 SOD指標6小時時刻比較:
　　1.2.1血清SOD指標比較:四組小鼠血清SOD水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清SOD水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差

8、異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;空白組血清SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），Gln低劑量組血清SOD水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　1.2.2肝臟SOD指標比較:四組小鼠肝臟SOD水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。模型組肝臟SOD水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;模型組肝臟SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比

9、，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Gln低劑量組肝臟SOD水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　1.3 SOD指標12小時時刻比較:
　　1.3.1血清SOD指標比較:四組小鼠血清SOD水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清SOD水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Gln低劑量組血清SOD水平和Gln高劑量組比

10、較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　1.3.2肝臟SOD指標比較:四組小鼠肝臟SOD水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組肝臟SOD水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Gln低劑量組肝臟SOD水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2、小鼠血清和肝臟GSH-Px指標水平比較:
　　2.1 GSH-Px指標1小

11、時時刻比較:
　　2.1.1血清GSH-Px指標比較:四組小鼠血清GSH-Px水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清GSH-Px水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;模型組血清GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　2.1.2肝臟GSH

12、-Px指標比較:四組小鼠肝臟GSH-Px水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組肝臟GSH-Px水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;而模型組肝臟GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Gln低劑量組肝臟GSH-Px水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.2 GSH-Px指標6小時時刻比較:
　　2.2.1

13、血清GSH-Px指標比較:四組小鼠血清GSH-Px水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清GSH-Px水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;空白組血清GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　2.2.2肝臟GSH-

14、Px指標比較:四組小鼠肝臟GSH-Px水平相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型組肝臟GSH-Px水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);空白組GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05); Gln低劑量組肝臟GSH-Px水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.3 GSH-Px指標12小時時刻比較:
　　2.3.1血清GSH-Px指

15、標比較:四組小鼠血清GSH-Px水平相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清GSH-Px水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.3.2肝臟GSH-Px指標比較:四組小鼠肝臟GSH-Px水平相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組肝臟GSH-P

16、x水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3、小鼠血清和肝臟MDA指標水平比較:
　　3.1 MDA指標1小時時刻水平比較:
　　3.1.1血清MDA指標比較:四組小鼠血清MDA水平相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清MDA水平與空白組比較，差異有

17、統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;模型組血清MDA水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　3.1.2肝臟MDA指標比較:四組小鼠肝臟MDA水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組肝臟MDA水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;而模型組肝臟MDA水平與Gln低劑量組和Gln

18、高劑量組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Gln低劑量組肝臟MDA水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.2 MDA指標6小時時刻水平比較:
　　3.2.1血清MDA指標比較:四組小鼠血清MDA水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清MDA水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); MDA水平差異均無統(tǒng)計學意義(P

19、＞0.05);Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　3.2.2肝臟MDA指標比較:四組小鼠肝臟MDA水平相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型組肝臟MDA水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;模型組肝臟MDA水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），Gln低劑量組肝臟MDA水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0

20、.05）。
　　3.3 MDA指標12小時時刻水平比較:
　　3.3.1血清MDA指標比較:四組小鼠血清MDA水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組血清MDA水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05); Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。
　　3.3.2肝臟MDA指標比較:四組小鼠肝臟MDA水平相比

21、，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。進行兩兩比較，模型組肝臟MDA水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05); Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　結論:膿毒癥能夠導致小鼠發(fā)生氧化損傷和氧化應激，而谷氨酰胺能夠提高小鼠體內抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量，提高其抗氧化能力。谷氨酰胺可使小鼠體內脂質代謝產物MDA的水平降低，從而降低有