熱量限攝對氧化應激與抗氧化系統(tǒng)的影響及機制研究.pdf

1、背景：許多疾病，如高血壓、糖尿病、動脈粥樣硬化及神經退行性病，都與個體的老化有密切關系，被稱為老化相關疾病(age-related diseases，ARD)。盡管采用多種防治措施，這些ARD在全世界仍然具有很高的發(fā)病率，給社會和家庭帶來嚴重的經濟負擔。研究證明熱量限攝(caloric restriction，CR)能夠延緩衰老，推遲ARD的發(fā)生，延長多種模式動物的壽命，是衰老及ARD的最有效的干預措施。盡管目前已經有大量的研究，但CR

2、的有效作用機制并不清楚。近期研究發(fā)現(xiàn)CR可能通過減輕氧化應激來延長壽命。因為氧化應激可由自由基產生過多引起，或因抗氧化防御系統(tǒng)下降而致，所以在本文中我們區(qū)分了這樣的可能性。我們的結果證明CR減輕氧化應激伴隨著ROS的減少和抗氧化系統(tǒng)表達的上調，且轉錄因子FOXO3a和SIRT2是調控這個過程的重要分子。
　　 目的：闡明熱量限攝減輕氧化應激以及上調抗氧化系統(tǒng)的機制，為尋找新穎有效的延緩衰老藥物靶點提供科學依據(jù)。
　　 方

3、法：我們將C57雌性小鼠分為正常組，CR組，CR+VC組。正常組喂普通飲食，CR組喂60％的普通飲食。我們將動物斷頸處死，分別在1天、2天、3天、7天、21天、28天這7個時間點取其肝臟、腎臟、卵巢。我們利用DCFA作為熒光探針，通過流式細胞儀來檢測肝臟線粒體中ROS的生成量。同時我們運用real-time PCR技術檢測幾個抗氧化基因及SIRT2、FOXO3a的動態(tài)變化。此外，我們還運用過表達技術和siRNA干擾技術對SIRT2進行過

4、表達和敲除，從這兩方面來探索SIRT2調控氧化應激的作用機制。
　　 結果：我們的結果表明在限食一個月后，CR對本文中涉及到的大多數(shù)基因的改變接近穩(wěn)態(tài)值。CR組的小鼠肝臟線粒體中ROS的生成量在第一天顯著降低并在整個實驗期間維持低水平。然而，不同限食組織中抗氧化系統(tǒng)的變化趨勢是有區(qū)別的。在肝臟和腎臟中，抗氧化基因經歷了起初的降低，然后逐漸恢復并有升高趨勢的動態(tài)過程；在卵巢中，這幾個抗氧化基因進行著時而上升時而下降的周期振蕩。而S

5、IRT2在這三種組織中的表達量的變化趨勢與相應組織中抗氧化基因的變化趨勢是一致的。與此同時，VC對CR作用的影響在三種組織中也是有差別的。在肝臟中，VC能加強CR對抗氧化系統(tǒng)的作用；在腎臟中，VC對抗氧化系統(tǒng)的的作用與CR是相反的；在卵巢中，VC也能加強CR對抗氧化系統(tǒng)的作用。且VC對CR在SIRT2表達量方面的影響與在抗氧化系統(tǒng)方面的影響是相一致的。另外在限食一個月期間，小鼠的體重均處于下降狀態(tài)。最后，我們利用體外表達系統(tǒng)探索了氧化應