miR-155對小鼠膿毒癥急性肺損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　通過建立膿毒癥急性肺損傷（ALI）小鼠模型，觀察膿毒癥小鼠肺組織內miR-155表達變化，探討其對膿毒癥ALI的影響及機制。
　　方法：
　　1.盲腸結扎穿孔術（CLP）構建膿毒癥ALI小鼠模型。實驗分兩組：假手術對照組（Sham組）和手術組（CLP組）；分別于術后0h、6h、12h、24h、48h取肺泡灌洗液（BALF）和肺組織標本。
　　2.SPF級BALB/c小鼠經氣管內滴入miR-155ago

2、mir轉染復合物，轉染后6h、12h、24h、36h、72h收集肺組織標本，對照組滴入PBS、NegtiveControl(NC)；體內轉染miR-155后1h進行CLP術，術后24h收集BALF和肺組織標本。
　　3．分別在光鏡下觀察小鼠肺組織病理改變；計算肺組織濕干重比值（W/D）；采用ELISA檢測BALF中TNF-α、IL-1β水平，RT-qPCR檢測肺組織miR-155表達，westernblot檢測肺組織Caspase

3、-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、TAB2表達，電鏡下觀察自噬小體數量。
　　結果：
　　1.光鏡下觀察到Sham組肺泡結構正常，CLP組肺泡結構紊亂、消失，肺泡間隔增厚、斷裂，肺泡內可見大量炎癥細胞浸潤及出血；與Sham組比較，肺組織W/D、Caspase-1表達和BALF中TNF-α、IL-1β水平均隨著CLP時間的延長逐漸增加，24h達到高峰（5.59±0.54vs4.03±0.18、2.15±0.30vs0.93±0.13和236

4、7.35±624.35pg/mlvs131.89±40.84pg/ml，152.97±52.27pg/mlvs64.33±20.54pg/ml）；miR-155從CLP術后6h開始時升高，24h達到高峰（15.66±2.06vs1.00±0.00）；差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表明CLP術后24h成功構建小鼠膿毒癥ALI模型，且miR-155在膿毒癥ALI小鼠肺內表達上調。
　　2.轉染miR-155agomir復合物24

5、h后肺組織勻漿中miR-155表達倍數升高至（49.51±8.92）倍，miR-155在體內可穩(wěn)定表達36h；在膿毒癥ALI小鼠肺內，轉染miR-155后，與NC組比較，光鏡下觀察到肺泡間隔增厚減輕、炎癥細胞浸潤減少，肺組織W/D及BALF中TNF-α、IL-1β水平均明顯下降（5.03±0.15vs5.62±0.52和783.53±229.11pg/mlvs2029.95±766.80pg/ml，109.13±13.10pg/mlvs

6、209.85±50.06pg/ml），肺組織中Caspase-1表達下調（1.03±0.06vs0.48±0.26）；差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表明過表達miR-155能夠減輕膿毒癥ALI肺內炎癥反應。
　　3.在膿毒癥ALI小鼠肺內，LC3Ⅱ/Ⅰ表達增加（2.6±0.20vs0.95±0.12），電鏡下觀察到自噬小體增加（4.8±0.84vs1.0±0.70）；轉染miR-155后，在膿毒癥ALI小鼠肺內TAB2表達下

7、調（0.51±0.07vs1.11±0.13）、LC3Ⅱ/Ⅰ表達增加（1.89±0.15vs1.00±0.07），自噬小體數量增加（8.50±0.76vs3.33±0.42）；差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表明miR-155可能通過靶向TAB2上調膿毒癥ALI小鼠肺內自噬。
　　結論：
　　膿毒癥ALI小鼠肺組織中miR-155表達增加，miR-155可能通過靶向TAB2蛋白，上調自噬，抑制Caspase-1的表達，減