不結球白菜離體培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化及抗病轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、摘要不結球白菜離體培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化及抗病轉(zhuǎn)基因研究摘要不結球白菜(BrasMcacarnpestrissspchinensisMakino)是我國南方重要的葉菜類蔬菜，在蔬菜的周年供應中占有重要地位然而不結球白菜生產(chǎn)中病毒病，霜霉病及軟腐病等病害較嚴重，嚴重影響了其品質(zhì)和產(chǎn)量，利用基因工程培育新品種是急需解決的問題白菜類蔬菜是離體培養(yǎng)再生困難的一類作物，而基因工程等高科技育種技術都是建立在穩(wěn)定可靠的高頻率離體再生體系的基礎上探討影響不

2、結球白菜高頻率再生體系的因素具有重要的理論和實踐意義本試驗以暑綠、蘇州青，亮白葉和矮抗五號為材料，篩選了較易再生的不結球白菜品種，并研究了基因型外植體類型以及不同的激素配比對再生頻率的影響，優(yōu)化了不結球白菜再生體系；并利用根癌農(nóng)桿菌介導的方法，通過研究Km的適宜篩選濃度及加入時間，不同的外植體類型、預培養(yǎng)時間和共培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化效率的影響，初步建立了不結球白菜抗病基因遺傳轉(zhuǎn)化體系，結果表明：1不同品種中，暑綠的再生頻率最高。不同外植體類型

3、中，子葉一子葉柄再生頻率最高種子發(fā)芽培養(yǎng)基中添加TDZ使幼苗生長健壯，利于外植體分化，不定芽分化率均在60％=2上，子葉子葉柄在培養(yǎng)基MNTDZ05mgoL1NAA05mgL1AgN0375nagL‘1中再生頻率最高，達到80％，表明TDZ在誘導器官的發(fā)生中有較強的持續(xù)效應2Km的適宜濃度為15mg／L，采用延期篩選的方法進行篩選，下胚軸較子葉一子葉柄有較高的轉(zhuǎn)化效率，預培養(yǎng)和共培養(yǎng)時間均為2天，共培養(yǎng)結束后，經(jīng)GUS瞬時表達檢測為陽性

4、，并獲得了卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)基因植株，經(jīng)PCR檢測證明InBING基因已整合到不結球白菜核基因組中關鍵詞：不結球白菜；離體再生；農(nóng)桿菌介導法；InBING基因ABSTRA(r2TheoptimadconcenWationofKmwas15mgL1andWeusedthedelayedselectionmethod；hypoco夠lhadhighertransformationefficiencythanpetiolewithcotyled

5、on；theprecultivafiontimeandcocultivationtimew嘴twodays；aftercocultivationthelramientexpressionofGUStestw罄positiveandWegotanfikanamycinphntsThePCRtestprovedthattheIuBINGgenehaveintegra：IedintotheplantgenomeofnonheadingChin