雷帕霉素聯(lián)合調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)受體小鼠移植心臟及抗腫瘤免疫的影響.pdf

1、目的：
　　研究短期使用雷帕霉素聯(lián)合調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）在誘導(dǎo)同種異體小鼠心臟移植物長(zhǎng)期存活，同時(shí)探討此方案對(duì)移植受體腫瘤免疫的影響。
　　方法：
　　免疫磁珠法分離得到受體小鼠脾臟Treg，經(jīng)CD3/CD28單克隆抗體磁珠及2000 U/mL重組小鼠白介素2（recombinant murine IL-2，rmIL-2）體外擴(kuò)增后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)純度；建立小鼠腹腔同種異體心臟移

2、植模型（H-2b到H-2d），分為對(duì)照組（單純移植）、雷帕霉素組、雷帕霉素聯(lián)合 Treg組。雷帕霉素組連續(xù)14d經(jīng)腹腔注射雷帕霉素1mg/(kg·d)，雷帕霉素聯(lián)合Treg組注射相同劑量的雷帕霉素，并于移植當(dāng)天經(jīng)尾靜脈過(guò)繼輸注擴(kuò)增后的 Treg（1×107/只），同時(shí)設(shè)同基因移植組（H-2d到H-2d），每日觀察移植心臟搏動(dòng)并在相應(yīng)時(shí)點(diǎn)進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。在受體腫瘤免疫實(shí)驗(yàn)中設(shè)三組同種異體心臟移植（H-2b到H-2d），同時(shí)經(jīng)尾靜脈過(guò)繼輸注

3、 B16-F10細(xì)胞（H-2b）（供體來(lái)源），另三組同種異體心臟移植（H-2d到H-2b）小鼠經(jīng)尾靜脈過(guò)繼輸注B16-F10細(xì)胞（H-2b）（受體來(lái)源），兩周后比較肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量。
　　結(jié)果：
　　CD4+CD25+Foxp3+Treg擴(kuò)增前純度為86.68%±0.02%（n=5)，體外加入擴(kuò)增2周后Treg數(shù)量達(dá)到了初始數(shù)量的30~40倍，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+ Treg純度為84.58%±0.03

4、%，與擴(kuò)增前相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)照組移植心臟中位生存時(shí)間（MST）為7 d，雷帕霉素組為15 d，雷帕霉素聯(lián)合Treg過(guò)繼輸注能夠顯著延長(zhǎng)移植心臟MST至93 d，組織學(xué)顯示長(zhǎng)期存活心臟淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及慢性血管病變；對(duì)于供體來(lái)源腫瘤，對(duì)照組未見腫瘤結(jié)節(jié)，雷帕霉素組為（15±8）個(gè)，雷帕霉素聯(lián)合Treg組小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)為（14±7）個(gè)，后2組類似無(wú)顯著性差異；對(duì)于受體來(lái)源腫瘤，對(duì)照組腫瘤結(jié)節(jié)為（70±12）個(gè)、雷帕霉素